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神奇的網(wǎng)站新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
求固相萃取儀的使用經(jīng)驗(yàn) 已有1人參與
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各位蟲(chóng)友， 我想請(qǐng)教下關(guān)于固相萃取儀及如何使用它對(duì)物質(zhì)進(jìn)行純化，之前從來(lái)沒(méi)用過(guò)，請(qǐng)用過(guò)的蟲(chóng)友們分享下經(jīng)驗(yàn)。我這是在純化全麥粉中提取的葉酸（維生素B9）。 這是我的純化條件（我對(duì)它的理解是這樣的，請(qǐng)指正哈） 實(shí)驗(yàn)儀器及耗材：固相萃取儀，Baker 7091-3萃取小柱（圖片是在網(wǎng)上down的，實(shí)驗(yàn)室還沒(méi)買，如果蟲(chóng)友有推薦的品牌，求分享） 實(shí)驗(yàn)試劑：己烷、甲醇、0.1M 磷酸氫二鉀（pH8-9）、0.1M乙酸鈉（pH4.5）、0.1%抗壞血酸、0.1% 2-巰基乙醇 實(shí)驗(yàn)步驟： 1、活化柱子→先加3ml 己烷后加3ml 甲醇潤(rùn)洗柱子 2、平衡柱子→5ml 0.1M磷酸氫二鉀溶液潤(rùn)洗 3、上樣→用5ml 提取液溶于2ml 磷酸氫二鉀中，洗脫速度0.6ml/min 4、沖洗→柱子用2ml 磷酸氫二鉀溶液潤(rùn)洗 5、洗脫出樣品用3ml 0.1M乙酸鈉（pH4.5）（有5% 磷酸氫二鉀、0.1%抗壞血酸、0.1% 2-巰基乙醇）洗提，最終過(guò)0.45um 過(guò)濾親水膜 問(wèn)題：1、活化，上樣，潤(rùn)洗，沖洗每一步大約是多久呢？ 2、我只需收集最后洗脫出來(lái)的樣品，那前四步滴加的液體會(huì)被柱子吸附而不會(huì)留下來(lái)對(duì)吧？ 3、柱子是可以循環(huán)利用的么？還是一次性的呢？ 捕獲.PNG 1.PNG IMG140529094405984801.jpg 61561403702872.jpg |
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
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1. 每步的時(shí)間不一定，從萃取柱滴落的液體控制在1滴/1s就行，不能太快，如果用流速表示大概2～5mL/min。 2. 前幾步滴加的液體已經(jīng)流出萃取柱了 3. 一般是一次性的，不重復(fù)利用。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
2樓2016-01-08 14:03:26
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