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新蟲 (初入文壇)

應助: 0 (幼兒園)
金幣: 149.8
散金: 20
帖子: 49
在線: 12.9小時
蟲號: 4030407
注冊: 2015-08-20
性別: MM
專業(yè): 作物分子育種

[求助] 求固相萃取儀的使用經驗已有1人參與

各位蟲友，
      我想請教下關于固相萃取儀及如何使用它對物質進行純化，之前從來沒用過，請用過的蟲友們分享下經驗。我這是在純化全麥粉中提取的葉酸（維生素B9）。
這是我的純化條件（我對它的理解是這樣的，請指正哈）

實驗儀器及耗材：固相萃取儀，Baker 7091-3萃取小柱（圖片是在網上down的，實驗室還沒買，如果蟲友有推薦的品牌，求分享）
實驗試劑：己烷、甲醇、0.1M 磷酸氫二鉀（pH8-9）、0.1M乙酸鈉（pH4.5）、0.1%抗壞血酸、0.1% 2-巰基乙醇

實驗步驟： 1、活化柱子→先加3ml 己烷后加3ml 甲醇潤洗柱子
               2、平衡柱子→5ml 0.1M磷酸氫二鉀溶液潤洗
               3、上樣→用5ml 提取液溶于2ml 磷酸氫二鉀中，洗脫速度0.6ml/min
            4、沖洗→柱子用2ml 磷酸氫二鉀溶液潤洗
            5、洗脫出樣品用3ml 0.1M乙酸鈉（pH4.5）（有5% 磷酸氫二鉀、0.1%抗壞血酸、0.1% 2-巰基乙醇）洗提，最終過0.45um 過濾親水膜

   問題：1、活化，上樣，潤洗，沖洗每一步大約是多久呢？
               2、我只需收集最后洗脫出來的樣品，那前四步滴加的液體會被柱子吸附而不會留下來對吧？
               3、柱子是可以循環(huán)利用的么？還是一次性的呢？

捕獲.PNG

1.PNG

IMG140529094405984801.jpg

61561403702872.jpg

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1樓 2016-01-08 09:24:02

已閱回復此樓關注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

學術巨星

專家顧問 (正式寫手)

專家經驗: +179
ACI: 2
應助: 241 (大學生)
貴賓: 0.086
金幣: 11158.8
紅花: 63
帖子: 862
在線: 161小時
蟲號: 1227581
注冊: 2011-03-10
性別: GG
專業(yè): 色譜分析
管轄: 分析

【答案】應助回帖

感謝參與，應助指數 +1

1. 每步的時間不一定，從萃取柱滴落的液體控制在1滴/1s就行，不能太快，如果用流速表示大概2～5mL/min。
2. 前幾步滴加的液體已經流出萃取柱了
3. 一般是一次性的，不重復利用。

發(fā)自小木蟲IOS客戶端

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回復此樓

2樓2016-01-08 14:03:26

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