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俊鋒新蟲 (初入文壇)
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[求助]
是個(gè)小白，求助關(guān)于pcr，跑電泳，沒(méi)p出條帶，點(diǎn)樣孔會(huì)亮。 已有4人參與
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做5‘RACE PCR 提取植物的RNA后，用Smart試劑盒反轉(zhuǎn)錄出cDNA，以cDNA為模板，做pcr，沒(méi)p出條帶，點(diǎn)樣孔會(huì)亮，做了兩次pcr，兩次都出現(xiàn)這種情況 第一次做pcr的時(shí)候用了兩個(gè)模板，退火溫度是70與64，點(diǎn)樣孔沒(méi)亮；溫度是60與55，點(diǎn)樣孔會(huì)亮的。 第二次做pcr，希釋一個(gè)模板，做溫度梯度pcr，溫度設(shè)在63 61.4 58.9 56 53.5 51.9 51度，63度點(diǎn)樣孔沒(méi)亮，其他的都亮了，沒(méi)p出條帶。 其他師姐他們用同一個(gè)pcr儀可以p出條帶。 現(xiàn)在做這個(gè)實(shí)驗(yàn)換了幾次試劑盒，再做下去老師的錢都被我用光了。 求個(gè)位大神幫幫忙忙 第二次pcr電泳圖 |
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hanxiaominhu
至尊木蟲 (著名寫手)
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8樓2016-01-11 11:49:26
奇怪人生123
銀蟲 (小有名氣)
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2樓2016-01-11 10:48:41
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myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-12 20:42:07
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香，分子生物期待您更多精彩。 2016-01-12 20:42:07
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How was the quality of your RNA extracted? I think your PCR templates were rich in poly/oligosaccharides, polyphenols and other unknown sticky compounds that bind or co-precipitae with DNA and form a viscous complex. Such DNA sample is usually neither suitable for PCR amplification nor even possible to load into the electrophoresis well. |
3樓2016-01-11 10:59:15
俊鋒
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 4
- 帖子: 26
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- 專業(yè): 生物化學(xué)
4樓2016-01-11 11:17:45
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