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紫萸香慢001新蟲 (小有名氣)
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[交流]
求教求教:Taq酶作用？？？有沒有人告訴我
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Taq酶有沒有逆轉(zhuǎn)錄酶的作用，比如我拿mRNA加入Taq酶，最終能合成cDNA嗎。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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沒有用的。。。去買個(gè)反轉(zhuǎn)錄試劑盒，反轉(zhuǎn)錄cDNA不僅僅需要逆轉(zhuǎn)錄酶，還需要在反轉(zhuǎn)錄之前消化一下你提取的RNA里面的DNA，這樣弄出來的cDNA質(zhì)量才高。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2016-01-16 23:11:30
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提取RNA做不到百分百純，絕對(duì)會(huì)混有DNA的，在進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄的時(shí)候必須用DNA酶消化，去除所有RNA，不知道你查的是什么文獻(xiàn)，總之taq酶沒有逆轉(zhuǎn)錄功能。有些反轉(zhuǎn)錄試劑盒里面有DNA消化酶，比如說我用的takara公司反轉(zhuǎn)錄試劑盒，你要是沒有的話單獨(dú)去買一個(gè)消化DNA的試劑盒吧。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
12樓2016-01-17 09:15:21
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我是做植物的，提取了RNA后直接取1ugRNA先用DNase消化5分鐘然后做反轉(zhuǎn)錄，沒有做PCR驗(yàn)證，因?yàn)橹灰隽薉NA消化，百分百是可以除盡DNA的，如果你不放心，那就在消化之后再做一遍PCR驗(yàn)證就好了，記得PCR驗(yàn)證之前把消化體系加熱滅除DNase活性，然后再取0.5ul去做模板，如果結(jié)果為陰性，結(jié)合你沒做消化結(jié)果為陽性，那樣就很好像別人說明你這個(gè)的的確確去除了DNA污染。住樓主實(shí)驗(yàn)順利。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
16樓2016-01-17 23:36:20
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19樓2016-01-18 11:09:16
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