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牧野小桃新蟲 (小有名氣)
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[求助]
利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除擬南芥某一功能未知的基因，流程是怎樣的？急求�。。�！ 已有2人參與
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利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除擬南芥某一功能未知的基因，流程是怎樣的？急求！�。�！ 就是這個問題， 還有一個可以將目的基因整合進(jìn)去？基本過程又是什么？ 希望大神幫忙啊， 不要給推薦文獻(xiàn)了，直接說一下過程吧，謝啦，明天下午就考試了呢。。 |
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牧野小桃
新蟲 (小有名氣)
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2樓2016-01-17 16:49:05
fjtony163
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米米
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+4, 鼓勵回帖交流 2016-02-27 16:38:56
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+4, 鼓勵回帖交流 2016-02-27 16:38:56
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具體到這個生物我是不知道了 我說一下我們在人體細(xì)胞里用的吧 設(shè)計gRNA 和Cas9 一起通過逆轉(zhuǎn)錄進(jìn)入細(xì)胞里 gRNA會和Cas9一起 在目的基因附近將雙鏈切斷 通過細(xì)胞的NHEJ （非同源末端鏈接）會導(dǎo)入堿基對增加或者減少 造成隨機(jī)變異 就達(dá)到敲除的作用了。 所以主要流程就是設(shè)計gRNA 然后和Cas9 一起轉(zhuǎn)染到細(xì)胞里 基本上沒有什么特別復(fù)雜的步驟 只是說gRNA設(shè)計軟件也有其局限性 一般選取前幾位的 然后通過實際敲除效果來看到底選哪個比較好。 |
3樓2016-01-18 05:10:44
4樓2016-01-19 12:14:45
日子有風(fēng)
新蟲 (初入文壇)
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5樓2016-02-27 15:58:49
fudan671
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6樓2016-02-27 18:52:13
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