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牧野小桃新蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除擬南芥某一功能未知的基因,流程是怎樣的?急求!。! 已有2人參與
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利用CRISPR/Cas9技術(shù)敲除擬南芥某一功能未知的基因,流程是怎樣的?急求。。! 就是這個(gè)問(wèn)題, 還有一個(gè)可以將目的基因整合進(jìn)去?基本過(guò)程又是什么? 希望大神幫忙啊, 不要給推薦文獻(xiàn)了,直接說(shuō)一下過(guò)程吧,謝啦,明天下午就考試了呢。。 |
新蟲(chóng) (初入文壇)

版主 (文壇精英)
米米
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具體到這個(gè)生物我是不知道了 我說(shuō)一下我們?cè)谌梭w細(xì)胞里用的吧 設(shè)計(jì)gRNA 和Cas9 一起通過(guò)逆轉(zhuǎn)錄進(jìn)入細(xì)胞里 gRNA會(huì)和Cas9一起 在目的基因附近將雙鏈切斷 通過(guò)細(xì)胞的NHEJ (非同源末端鏈接)會(huì)導(dǎo)入堿基對(duì)增加或者減少 造成隨機(jī)變異 就達(dá)到敲除的作用了。 所以主要流程就是設(shè)計(jì)gRNA 然后和Cas9 一起轉(zhuǎn)染到細(xì)胞里 基本上沒(méi)有什么特別復(fù)雜的步驟 只是說(shuō)gRNA設(shè)計(jì)軟件也有其局限性 一般選取前幾位的 然后通過(guò)實(shí)際敲除效果來(lái)看到底選哪個(gè)比較好。 |
新蟲(chóng) (初入文壇)
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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