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[求助]
求養(yǎng)raw264.7.經(jīng)驗。 已有2人參與
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跪求養(yǎng)細胞經(jīng)驗。本人研一，現(xiàn)在需要raw246.7做實驗，可是養(yǎng)的細胞老是變長，發(fā)生分化，以至于無法做實驗。從新復(fù)蘇細胞，細胞存活率又很低。又實在找不出養(yǎng)不好這個細胞原因。求大神指點 [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
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3樓2016-01-21 20:18:21
zhangshuman
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2樓2016-01-21 19:49:06
zhangshuman
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4樓2016-01-21 21:04:23
shengliding
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【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
| RAW細胞應(yīng)該是最好養(yǎng)的了，隨便在網(wǎng)上搜一下，會有很多關(guān)于這方面的方法。液氮保存的細胞取出來活化，也要按照要求來凍融，包括培養(yǎng)基和血清的預(yù)熱。平時根據(jù)你接種的數(shù)量來換培養(yǎng)液，3天換一次，5天轉(zhuǎn)一代，保持在80%的覆蓋率，也可以簡單根據(jù)培養(yǎng)液的顏色變化，等都變黃了，狀況就太差了，換的時候還要用PBS沖洗兩三遍。轉(zhuǎn)代也要注意，要PBS沖洗干凈，trypsin處理時間的把握等。 有的人說7-10代就丟掉，有的說沒關(guān)系，我用到高代也沒見有什么變化，以防萬一，重要測試最好用代數(shù)少的。要養(yǎng)好細胞，要用心，細心，勤觀察和良好的操作習(xí)慣。 |
5樓2016-01-23 08:49:31
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