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求養(yǎng)raw264.7.經(jīng)驗(yàn)。 已有2人參與
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跪求養(yǎng)細(xì)胞經(jīng)驗(yàn)。本人研一,現(xiàn)在需要raw246.7做實(shí)驗(yàn),可是養(yǎng)的細(xì)胞老是變長,發(fā)生分化,以至于無法做實(shí)驗(yàn)。從新復(fù)蘇細(xì)胞,細(xì)胞存活率又很低。又實(shí)在找不出養(yǎng)不好這個(gè)細(xì)胞原因。求大神指點(diǎn) [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
新蟲 (小有名氣)
| RAW細(xì)胞應(yīng)該是最好養(yǎng)的了,隨便在網(wǎng)上搜一下,會有很多關(guān)于這方面的方法。液氮保存的細(xì)胞取出來活化,也要按照要求來凍融,包括培養(yǎng)基和血清的預(yù)熱。平時(shí)根據(jù)你接種的數(shù)量來換培養(yǎng)液,3天換一次,5天轉(zhuǎn)一代,保持在80%的覆蓋率,也可以簡單根據(jù)培養(yǎng)液的顏色變化,等都變黃了,狀況就太差了,換的時(shí)候還要用PBS沖洗兩三遍。轉(zhuǎn)代也要注意,要PBS沖洗干凈,trypsin處理時(shí)間的把握等。 有的人說7-10代就丟掉,有的說沒關(guān)系,我用到高代也沒見有什么變化,以防萬一,重要測試最好用代數(shù)少的。要養(yǎng)好細(xì)胞,要用心,細(xì)心,勤觀察和良好的操作習(xí)慣。 |
新蟲 (小有名氣)
新蟲 (小有名氣)
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