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林?木蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于昆蟲細(xì)胞的免疫熒光定位的問(wèn)題
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我現(xiàn)在做得是Bt蛋白受體在昆蟲細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)，表達(dá)后的細(xì)胞和Bt蛋白進(jìn)行孵育，然后用PBS洗細(xì)胞，多聚甲醛固定，PBS洗細(xì)胞，然后加一抗（Bt蛋白的特抗），PBS洗細(xì)胞，加FITC-二抗，洗細(xì)胞。最后在熒光倒置顯微鏡下觀察。 我現(xiàn)在的問(wèn)題是：表達(dá)的細(xì)胞有綠色熒光，正常細(xì)胞做對(duì)照（沒有表達(dá)受體）也有熒光。這是怎么回事？著急��！跪等畢業(yè)啊！ |
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對(duì)照熒光很明顯嗎，做共聚焦有時(shí)會(huì)有自發(fā)熒光，細(xì)胞上也會(huì)有，這種情況下要扣除背景音樂另一個(gè)情況，你得抗體可能存在非特異性結(jié)合。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-01-25 23:42:15
林?
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 2378.1
- 帖子: 109
- 在線: 189.9小時(shí)
- 蟲號(hào): 1226282
- 注冊(cè): 2011-03-09
- 專業(yè): 果樹學(xué)
3樓2016-01-26 08:22:22
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