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林?木蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于昆蟲(chóng)細(xì)胞的免疫熒光定位的問(wèn)題
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我現(xiàn)在做得是Bt蛋白受體在昆蟲(chóng)細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá),表達(dá)后的細(xì)胞和Bt蛋白進(jìn)行孵育,然后用PBS洗細(xì)胞,多聚甲醛固定,PBS洗細(xì)胞,然后加一抗(Bt蛋白的特抗),PBS洗細(xì)胞,加FITC-二抗,洗細(xì)胞。最后在熒光倒置顯微鏡下觀察。 我現(xiàn)在的問(wèn)題是:表達(dá)的細(xì)胞有綠色熒光,正常細(xì)胞做對(duì)照(沒(méi)有表達(dá)受體)也有熒光。這是怎么回事?著急。」虻犬厴I(yè)。 |
木蟲(chóng) (小有名氣)
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對(duì)照熒光很明顯嗎,做共聚焦有時(shí)會(huì)有自發(fā)熒光,細(xì)胞上也會(huì)有,這種情況下要扣除背景音樂(lè)另一個(gè)情況,你得抗體可能存在非特異性結(jié)合。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
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