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8128sherry新蟲 (初入文壇)
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[求助]
新手有幾個關(guān)于WESTER BLOT之前做的BUFFER的問題 已有1人參與
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第一個是關(guān)于RIPA BUFFER，我之前在網(wǎng)上看到的配方里面沒有DTT，而有的有，做的時候，老師也沒要求加，所以我想問下這個DTT是必須的么？查了一下之前有人回答的，答案也是五花八門。這個不加是否會對提取蛋白質(zhì)造成很大影響呢？ 然后是制備好了protein sample之后，老師也沒有讓我做離心，而是直接做protein assay (Bradford assay)。。。但是我看不管國內(nèi)國外材料都寫到要做離心，這個不做會有影響么？因為之前有個朋友做蛋白質(zhì)提取，說也沒做離心。 另外對于加蛋白酶抑制劑和磷酸抑制劑，我是直接買的羅氏那個一片片裝的 ( Protease Inhibitors - Cocktail Tablets)，對于這個應(yīng)該放多少在RIPA BUFFER里呢，老師是跟我說各取一片，然后加10ML RIPA buffer 溶解，就行了，我也不太清楚這個濃度怎么算。。希望有大神給指點一下。。 第二個是關(guān)于loading buffer, 也是看的網(wǎng)上配方說要加溴酚藍(lán)，但是我老師也沒說要加。。。這個有影響么，我知道溴酚藍(lán)是染色的，可以看清電泳進(jìn)度，那么我不加是否就看不到了呢？ 主要看的實驗手冊和老師講的差的有點多，也不知道會不會影響實驗結(jié)果。。。有點慌張。。。  |
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yang0071
木蟲 (職業(yè)作家)
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2樓2016-01-29 11:43:28
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