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8128sherry新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
新手有幾個(gè)關(guān)于WESTER BLOT之前做的BUFFER的問(wèn)題 已有1人參與
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第一個(gè)是關(guān)于RIPA BUFFER，我之前在網(wǎng)上看到的配方里面沒(méi)有DTT，而有的有，做的時(shí)候，老師也沒(méi)要求加，所以我想問(wèn)下這個(gè)DTT是必須的么？查了一下之前有人回答的，答案也是五花八門。這個(gè)不加是否會(huì)對(duì)提取蛋白質(zhì)造成很大影響呢？ 然后是制備好了protein sample之后，老師也沒(méi)有讓我做離心，而是直接做protein assay (Bradford assay)。。。但是我看不管國(guó)內(nèi)國(guó)外材料都寫到要做離心，這個(gè)不做會(huì)有影響么？因?yàn)橹坝袀�(gè)朋友做蛋白質(zhì)提取，說(shuō)也沒(méi)做離心。 另外對(duì)于加蛋白酶抑制劑和磷酸抑制劑，我是直接買的羅氏那個(gè)一片片裝的 ( Protease Inhibitors - Cocktail Tablets)，對(duì)于這個(gè)應(yīng)該放多少在RIPA BUFFER里呢，老師是跟我說(shuō)各取一片，然后加10ML RIPA buffer 溶解，就行了，我也不太清楚這個(gè)濃度怎么算。。希望有大神給指點(diǎn)一下。。 第二個(gè)是關(guān)于loading buffer, 也是看的網(wǎng)上配方說(shuō)要加溴酚藍(lán)，但是我老師也沒(méi)說(shuō)要加。。。這個(gè)有影響么，我知道溴酚藍(lán)是染色的，可以看清電泳進(jìn)度，那么我不加是否就看不到了呢？ 主要看的實(shí)驗(yàn)手冊(cè)和老師講的差的有點(diǎn)多，也不知道會(huì)不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。。。有點(diǎn)慌張。。。  |
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yang0071
木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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2樓2016-01-29 11:43:28
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