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冷霜曉月新蟲 (初入文壇)
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[求助]
構(gòu)建植物過表達(dá)載體需不需要加入目的片段前的5'UTR？
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| 不加入是否會導(dǎo)致將來翻譯時核糖體沒有結(jié)合位點(diǎn)，無法翻譯出蛋白？如果可以不加入5'UTR只用CDS，沒有5'UTR，核糖體又是怎么識別該mRNA片段再進(jìn)行翻譯的？實(shí)驗(yàn)室有的人說可以不用，但又沒解釋個所以然出來，希望有大神能解釋一下~~~~ |
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冷霜曉月
新蟲 (初入文壇)
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能明確解釋下么？翻了書也沒找著解釋這塊的  就想知道為什么可以只研究編碼基因功能的超表達(dá)建議只用完整的ORF區(qū)域？5'UTR部分不是有核糖體的結(jié)合部位么？ 而且實(shí)驗(yàn)室其他人說保險起見，基本上構(gòu)載體的時候都會在起始密碼子之前加十幾二十bp左右的5'UTR部分，并不是只用完整的ORF區(qū)域。不過有的時候不加也能表達(dá)出蛋白，但我就好奇不加的話，新轉(zhuǎn)進(jìn)去基因轉(zhuǎn)錄出來的mRNA序列不是就直接從AUG開始了么，核糖體是怎么識別新mRNA翻譯出蛋白的，不是只要有5'UTR特定的核苷酸序列才能被核糖體識別的么？ |
4樓2016-02-06 21:33:47
jackyoung
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2樓2016-02-03 17:40:58
jackyoung
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另外，植物表達(dá)的話，如果不是要去研究5'-UTR，或者有文獻(xiàn)說沒有它不行，一般只研究編碼基因功能的超表達(dá)建議只用完整的ORF區(qū)域。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2016-02-03 17:43:29
jackyoung
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那本書告訴你5'-UTR就是核糖體結(jié)合位點(diǎn)了？那讓沒有UTR的基因情何以堪？是不是很多原核生物的基因都不用翻譯蛋白了？很多時候大家只是為了設(shè)計(jì)引物和克隆方便而已，還有弱弱的說一句，很多載體在啟動子下游的多克隆位點(diǎn)是有一段多余序列的。仔細(xì)查查書吧，看懂不容易…… 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-02-06 21:54:28
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