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培養(yǎng)大腸用什么培養(yǎng)基？只知道LB你就out了 已有17人參與
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大腸桿菌（Escherichia coli，E.coli）是與我們?nèi)祟愱P(guān)系最為密切的細(xì)菌之一，是人和動(dòng)物腸道中的正常棲居菌，嬰兒出生后即隨哺乳進(jìn)入腸道，與人終身相伴，幾乎占糞便干重的1/3。大腸桿菌同時(shí)也是生物技術(shù)領(lǐng)域應(yīng)用最為廣泛的細(xì)菌之一。大腸桿菌因遺傳背景清楚、載體受體系統(tǒng)完備、生長(zhǎng)迅速、培養(yǎng)簡(jiǎn)單、重組子穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)廣泛被應(yīng)用于基因工程領(lǐng)域。很多分子生物學(xué)家都是從制備大腸桿菌感受態(tài)細(xì)胞，從大腸內(nèi)提取質(zhì)粒這些基礎(chǔ)實(shí)驗(yàn)開(kāi)始的。 培養(yǎng)基，細(xì)胞的食物。培養(yǎng)大腸桿菌最常見(jiàn)的培養(yǎng)基是什么？LB培養(yǎng)基，很多人可以脫口而出。那么還有沒(méi)有其他的培養(yǎng)基能夠用來(lái)培養(yǎng)大腸桿菌呢。事實(shí)上為了達(dá)到不同的目的（高密度，節(jié)省成本等），除了LB培養(yǎng)基之外，還有很多種在實(shí)驗(yàn)室或者工業(yè)中應(yīng)用的培養(yǎng)基。小編將在這篇文章中總結(jié)介紹一些用來(lái)在實(shí)驗(yàn)室及工業(yè)中培養(yǎng)大腸桿菌的培養(yǎng)基。 LB培養(yǎng)基 依原則，BioEngX文章中首次出現(xiàn)的英文縮寫(xiě)一定會(huì)將英文全拼寫(xiě)給出的。但是LB卻是個(gè)例外。很多人都知道LB培養(yǎng)基，但LB代表的什么意思，很多人并不清楚。LB是兩個(gè)字母的首字母，這是肯定的。但是是哪兩個(gè)英文單詞呢。有人說(shuō)是Luria Broth， 也有人說(shuō)是 Lennx Broth, 還有人說(shuō)是Luria Bertain的。事實(shí)上，LB最初的配方是由Giuseppe Bertain在1951年發(fā)表的。Bertain表示LB是用來(lái)替代Lysogeny Broth這兩個(gè)單詞的 [1]。當(dāng)然LB兩個(gè)字母代替什么遠(yuǎn)沒(méi)有LB的配方重要。LB培養(yǎng)基的配方你記得嗎？不記得再看一遍。10 g 胰蛋白胨 （tryptone）；5 g 酵母提取物 （yeast extract）；10 g 氯化鈉（sodium chloride）溶解于 1 L水中。LB培養(yǎng)基非常容易制備，能夠允許大腸桿菌在搖瓶中，正常培養(yǎng)條件下（250 rpm）生長(zhǎng)到OD600 2-3左右。 SOB（Super Optimal Broth）培養(yǎng)基 SOB培養(yǎng)基是另一種富營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基。與LB培養(yǎng)基相比，SOB培養(yǎng)基中含有兩倍多蛋白胨，蛋白胨中富含氨基酸及多肽。另外，SOB培養(yǎng)基中含有鎂離子，鎂離子是高密度培養(yǎng)必須的離子。利用SOB培養(yǎng)基培養(yǎng)大腸桿菌在普通條件（250rpm）下?lián)u瓶培養(yǎng)，菌濃可達(dá)到OD600 3-5左右，如果提高轉(zhuǎn)速到350 rpm， OD600最高能夠達(dá)到10-15。在SOB培養(yǎng)基中的大腸桿菌具有更高的轉(zhuǎn)化效率，因此常用SOB培養(yǎng)基制備感受態(tài)細(xì)胞。SOB培養(yǎng)基的配方如下： 2 % 胰蛋白胨, 0.5 % 酵母提取物, 10 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 10 mM MgCl2 , 10 mM MgSO4 注：%表示質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)，2 %即 100 mL水包括2 g 固體 SOC（Super Optimal broth with Catabolite repression）培養(yǎng)基 SOC培養(yǎng)基跟SOB培養(yǎng)基的唯一區(qū)別是SOC中包含有20 mM葡萄糖（glucose）。培養(yǎng)基中的葡萄糖充當(dāng)分解代謝抑制物（catabolite repressor）。大腸桿菌更傾向應(yīng)用葡萄糖作為碳源。因此在葡萄糖存在的情況下，其他的碳源的分解就會(huì)被抑制。在20 mM 葡萄糖存在下，乳糖不會(huì)被代謝，乳糖操縱子被抑制，外源基因不會(huì)發(fā)生表達(dá)，這就減少了外源基因表達(dá)給細(xì)胞帶來(lái)的生長(zhǎng)壓力。因此，利用SOC培養(yǎng)基進(jìn)行轉(zhuǎn)化反應(yīng)時(shí)，熱激后細(xì)胞生長(zhǎng)的速率會(huì)比LB培養(yǎng)基中高出很多。當(dāng)實(shí)驗(yàn)室中沒(méi)有儲(chǔ)存SOC培養(yǎng)基時(shí)，在LB中加入20 mM葡萄糖，效果是一樣的 。SOC培養(yǎng)基配方如下： 2 % 胰蛋白胨, 0.5 % 酵母提取物, 10 mM NaCl, 2.5 mM KCl, 10 mM MgCl2 , 10 mM MgSO4， 20 mM葡萄糖 2x YT 培養(yǎng)基 2x YT培養(yǎng)基是比LB培養(yǎng)基營(yíng)養(yǎng)更為豐富的培養(yǎng)基。與LB培養(yǎng)基成分相比， 2x YT培養(yǎng)基中包含有更多的的酵母提取物和胰蛋白胨。因?yàn)榕囵B(yǎng)基中營(yíng)養(yǎng)更豐富了，細(xì)胞能夠生長(zhǎng)更長(zhǎng)的時(shí)間，濃度達(dá)到更高的值。2x YT培養(yǎng)基主要用來(lái)進(jìn)行大腸桿菌以及像是M13這樣的細(xì)菌噬菌體的培養(yǎng)。由于大腸桿菌的濃度很高，在生產(chǎn)大量的噬菌體的同時(shí)，宿主仍然是存活的。2x YT培養(yǎng)基的配方如下： 1.6 %胰蛋白胨, 1 % 酵母提取物, 0.5% NaCl TB（Terrific Broth）培養(yǎng)基 TB 培養(yǎng)基是添加了磷酸鹽的復(fù)合型培養(yǎng)基。跟LB培養(yǎng)基相比，TB培養(yǎng)基中除了多出20 %的胰蛋白胨和380 %的酵母提取物以外，還多了 0.4 % 的甘油作為額外的碳源。所有這些元素能夠支持大腸桿菌在正常的搖瓶培養(yǎng)條件下生長(zhǎng)到 OD600 5 – 8。 TB培養(yǎng)基通常用于實(shí)驗(yàn)室規(guī)模的蛋白質(zhì)表達(dá)和質(zhì)粒提取。TB培養(yǎng)基配方如下： 2 % 胰蛋白胨, 2.4 % 酵母提取物, 72 mM K2HPO4, 17 mM KH2PO4, 0.4 % glycerol SB （Super Broth）培養(yǎng)基 與LB培養(yǎng)基相比，SB培養(yǎng)基成分中多出了220%的胰蛋白胨和380%的酵母提取物。因此SB培養(yǎng)基富含超多量的胰蛋白胨和酵母提取物。據(jù)估計(jì)蛋白胨和酵母提取物中包含的主要營(yíng)養(yǎng)元素遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過(guò)細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)到飽和時(shí)所需的量。SB培養(yǎng)基主要用于質(zhì)粒以及蛋白質(zhì)的提取。SB培養(yǎng)基配方如下： 3.2% 胰蛋白胨, 2%酵母提取物, 0.5% NaCl Reference: 【1】Bertani, G. (1951). Studies on lysogenesis. I. The mode of phage liberation by lysogenic Escherichia coli. J. Bacteriol. 62:293-300. 原文鏈接 http://www.bioengx.com/2016/01/31/e-coli-lysogeny-broth-media/ |
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