 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1666 | 回復: 7 | ||
[求助]
假單胞菌 同源重組 插入突變 蔗糖篩選 已有2人參與
|
|
各位大俠請求幫助 我做的是假單胞菌羧卞抗性的基因敲除試驗，選用的自殺質粒是PJQ200sk gent抗性，將基因的ATG上下游500-600bp片段擴增出來，在ATG下游20bp左右插入卡那霉素抗性基因，然后連入PJQ200sk 1.進行三親雜交，在卡那霉素和羧卞的平板上長斑，pcr驗證能夠檢測到突變后基因大小的片段，但是擴增不出來假單胞菌其他的基因，蔗糖篩選后也一樣 2.進行電轉，在卡那霉素和羧卞的平板上長斑，菌液pcr目的基因和其他基因都擴增不到，能再蔗糖板上張，也能在gent抗性的培養(yǎng)基中張 各位大俠幫幫忙 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有86人回復
-
蛋白質檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經有0人回復
-
納米粒度分析
已經有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經有0人回復
2樓2016-02-23 15:55:32
3樓2016-02-23 15:56:24
quiller2000
木蟲 (著名寫手)
- MolEPI: 1
- 應助: 160 (高中生)
- 貴賓: 0.114
- 金幣: 2752.9
- 散金: 50
- 紅花: 26
- 帖子: 1168
- 在線: 167.3小時
- 蟲號: 895537
- 注冊: 2009-11-06
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物資源與分類學
4樓2016-02-23 19:00:41
送紅花一朵 |
是說我的雙抗篩選后獲得的單克隆是否有gent抗性是嗎？ 我的電轉化后得到的轉化子是有gent抗性的，三親結合沒試過是否有gent抗性 我做的基因不是致死基因 抗生素交叉抗性的問題，我試過輔助菌和供體菌兩種菌不抗羧卞，受體菌不抗kana 麻煩幫我在分析一下可能還是哪些方面的問題 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-02-26 19:06:24
6樓2016-02-26 19:07:05
su2008su11
木蟲 (正式寫手)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 4299.4
- 紅花: 15
- 帖子: 625
- 在線: 45.1小時
- 蟲號: 4490342
- 注冊: 2016-03-10
- 性別: GG
- 專業(yè): 植物病理學
7樓2016-12-07 01:11:58
遠麗123
金蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 754.5
- 帖子: 57
- 在線: 20.8小時
- 蟲號: 2391156
- 注冊: 2013-03-31
- 專業(yè): 環(huán)境微生物學
【答案】應助回帖
| 你好 我的問題和你的一模一樣，我也是假單胞菌，我用的自殺質粒是pEX18GM,輔助菌是pRK600,我也是三親后涂平板驗證是對的（用敲出基因的1和4引物以及其他基因的引物都是有的，說明是單交換成功的菌），但是我再次挑目的菌在LB平板上劃線時，就一點也長不出來了，偶爾會有一點點的菌長出來，但是用假單胞菌的其他基因來擴就擴不出，而且蔗糖后用敲除的1和4 引物驗證還是對的，但是假單胞菌的其他基因還是沒有，我就把蔗糖后的菌拿去測序，發(fā)現(xiàn)是大腸桿菌。我的猜測是單交換的假單胞菌死掉了（不明白為什么死掉，抗生素的選擇是合適的），在LB上長出來的一點點的菌就是供體菌。但是為什么會這樣我就不明白了，這一步也是卡了很久了，請問你后來問題解決了嗎？？能否告知如何解決的，萬分感謝�。� |
8樓2017-12-28 15:59:21
相關版塊跳轉
我要訂閱樓主 會飛的魚622 的主題更新
| 8 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 考研化學308分求調劑 +5 | 你好明天你好 2026-03-23 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研]
求調劑材料學碩080500，總分289分
 5+3
|
@taotao 2026-03-19 | 21/1050 |
|
|
|
[考研] 北科281學碩材料求調劑 +8 | tcxiaoxx 2026-03-20 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 323求調劑 +6 | 洼小桶 2026-03-18 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 277材料科學與工程080500求調劑 +7 | 自由煎餅果子 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 328求調劑，英語六級551，有科研經歷 +6 | 生物工程調劑 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 287求調劑 +8 | 晨昏線與星海 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 求調劑院校信息 +6 | CX 330 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 311求調劑 +3 | 26研0 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 工科0856求調劑 +3 | 沐析汀汀 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +3 | 13341 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 279分求調劑 一志愿211 +14 | chaojifeixia 2026-03-19 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 070300化學319求調劑 +7 | 錦鯉0909 2026-03-17 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +3 | Ma_xt 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 南京大學化學376求調劑 +3 | hisfailed 2026-03-19 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 308求調劑 +3 | 阿姐阿姐家啊 2026-03-18 | 3/150 |
|
|
|
[考研]
 材料與化工 322求調劑
+4
|
然11 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +3 | 暗涌afhb 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 收復試調劑生 +4 | 雨后秋荷 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 有沒有道鐵/土木的想調劑南林，給自己招師弟中～ +3 | TqlXswl 2026-03-16 | 7/350 |
|