 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2465 | 回復: 2 | ||
真果粒新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
質(zhì)粒長片段pcr及質(zhì)粒的重新構(gòu)建 已有2人參與
|
|
準備在一個購買的一個質(zhì)粒（12kb）加一個基因，但由于沒有合適的酶切位點，所以準備先將原質(zhì)粒進行全長pcr，并在引物上添加酶切位點，最后和目的基因連接構(gòu)建新的質(zhì)粒。但在p質(zhì)粒全長的時候遇到如下圖（左邊兩泳道）的問題。即：目的條帶較暗，而點樣孔里面較亮。LArtaq和primestar GXL兩種酶都用過，也差不多都這樣。反應條件LArtaq：95℃：5min 94℃:45s (55-68℃)： 45s 72℃：11min 72℃：10min ，primestar GXL是根據(jù)其說明書來的：（三步法）95℃：5min 98℃:10s (65℃和60℃均用過)： 15s 72℃（說明書上用的是68℃也用過）：11min(說明書上超過10kb的延伸時間為10min，也試過) ;（兩步法）95℃：5min 98℃:10s 68℃：10min 68℃：10min。引物包裝上給出的溫度是70和72攝氏度（引物上加了酶切位點）。 各位大神，出現(xiàn)如圖的情況是啥原因？另外，進行用上面的方法重構(gòu)質(zhì)粒的方法可行嗎？ 小木蟲.jpg |
回復此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有246人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
-
留學--博士招生
已經(jīng)有16人回復
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復
-
湖北師范大學招調(diào)劑啦
已經(jīng)有4人回復
kangaroo0513
新蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 1
- 應助: 154 (高中生)
- 金幣: 2277.4
- 散金: 100
- 紅花: 29
- 帖子: 464
- 在線: 119.4小時
- 蟲號: 2621902
- 注冊: 2013-08-28
- 專業(yè): 細胞物質(zhì)運輸
2樓2016-02-22 15:09:13
3樓2016-02-22 16:24:16
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 真果粒 的主題更新
| 3 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 0703化學 +20 | 妮妮ninicgb 2026-03-27 | 20/1000 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 理學07化學 303求調(diào)劑 +7 | 睿08 2026-03-27 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿浙江大學工科動力工程370,數(shù)一121,專業(yè)課135，現(xiàn)在能去哪里 +3 | 080700調(diào)劑 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
[考研] 22408 359分調(diào)劑 +4 | Qshers 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 抱歉 +4 | 田洪有 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 297 地理學070500 復試求調(diào)劑 +3 | 小圓圈圈ooo 2026-03-30 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 0703 化學 求調(diào)劑，一志愿山東大學 342 分 +7 | Shern—- 2026-03-28 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 284求調(diào)劑 +14 | junqihahaha 2026-03-26 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 求化學調(diào)劑 +11 | wulanna 2026-03-28 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿211，335分，0856，求調(diào)劑院校和導師 +7 | 傾____蕭 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 070305高分子化學與物理 304分求調(diào)劑 +12 | c297914 2026-03-28 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +5 | Y-cap 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 349求調(diào)劑 +6 | 李木子啊哈哈 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0856材料化工調(diào)劑 總分330 +14 | zhubinhao 2026-03-27 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +8 | 小木蟲085600 2026-03-27 | 8/400 |
|
|
|
[有機交流]
高溫高壓反應求助
 10+4
|
chibby 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 279 分 求調(diào)劑 +4 | 睡個好覺_16 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑推薦 +5 | 清酒714 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[論文投稿] Journal of Mechanical Science and Technology +3 | Russ_ss 2026-03-25 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0854人工智能方向招收調(diào)劑 +4 | 章小魚567 2026-03-24 | 4/200 |
|