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icenoreen銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
Transwell遷移實(shí)驗(yàn)MSC細(xì)胞一個(gè)都遷移不下去T^T
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急求做過(guò)transwell細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)的前輩們賜教。 我用的是Corning#3422的8微米聚碳酸酯膜的24孔板，細(xì)胞是小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞（因?yàn)槭穷A(yù)實(shí)驗(yàn)，所以用的不是現(xiàn)提的，是以前提了用剩下凍存的，用作遷移實(shí)驗(yàn)的應(yīng)該能在5代以?xún)?nèi)，形態(tài)看起來(lái)也挺好的），因?yàn)橐郧皼](méi)做過(guò)細(xì)胞遷移實(shí)驗(yàn)，所以不敢直接用要測(cè)的蛋白，先用含不同百分?jǐn)?shù)血清（分別用了0.1%，1%，5%，10%的血清）的培基來(lái)做的預(yù)實(shí)驗(yàn)。做了兩次，每次用棉簽擦掉上室細(xì)胞以后染色就一個(gè)細(xì)胞也看不到了><，我試過(guò)一次一個(gè)平行孔不用棉簽擦的，染色的時(shí)候就能染出很多上室的細(xì)胞，說(shuō)明細(xì)胞完全沒(méi)有遷移到下室。 延長(zhǎng)了遷移時(shí)間（24h和48h都做了），還是遷移不下去，一個(gè)細(xì)胞都沒(méi)遷移到下室... 按理說(shuō)10%的血清應(yīng)該很明顯能發(fā)生遷移吧（不會(huì)是血清過(guò)低），所有看到的文獻(xiàn)上做MSC遷移用的也都是8微米的孔（也不會(huì)是孔太�。� 我也按照操作步驟經(jīng)過(guò)了24h饑餓處理的，上室細(xì)胞懸液用的是無(wú)血清培基（加了0.1%BSA保持滲透壓）。 用棉簽擦的操作我也在網(wǎng)上問(wèn)過(guò)，別人告訴我這個(gè)操作應(yīng)該沒(méi)什么問(wèn)題的…… 可是就是想不出為什么一個(gè)細(xì)胞也沒(méi)遷移下去><。我們組就我一個(gè)人做遷移實(shí)驗(yàn)，其他人都沒(méi)做過(guò)，我也是第一次做在摸索，所以很無(wú)助，實(shí)驗(yàn)沒(méi)法繼續(xù)做下去了... 誠(chéng)懇地請(qǐng)教做過(guò)的前輩出來(lái)傳授一下經(jīng)驗(yàn)，這個(gè)問(wèn)題有可能是什么原因造成的？應(yīng)該怎么解決？ 非常感謝！ |
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qhfei
銅蟲(chóng) (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 1470
- 帖子: 11
- 在線: 6.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 3907895
- 注冊(cè): 2015-06-04
- 性別: MM
- 專(zhuān)業(yè): 生物材料
2樓2015-10-12 10:43:11
3樓2017-09-04 19:05:57
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