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icenoreen銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
Transwell遷移實驗MSC細胞一個都遷移不下去T^T
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急求做過transwell細胞遷移實驗的前輩們賜教。 我用的是Corning#3422的8微米聚碳酸酯膜的24孔板，細胞是小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞（因為是預實驗，所以用的不是現(xiàn)提的，是以前提了用剩下凍存的，用作遷移實驗的應該能在5代以內(nèi)，形態(tài)看起來也挺好的），因為以前沒做過細胞遷移實驗，所以不敢直接用要測的蛋白，先用含不同百分數(shù)血清（分別用了0.1%，1%，5%，10%的血清）的培基來做的預實驗。做了兩次，每次用棉簽擦掉上室細胞以后染色就一個細胞也看不到了><，我試過一次一個平行孔不用棉簽擦的，染色的時候就能染出很多上室的細胞，說明細胞完全沒有遷移到下室。 延長了遷移時間（24h和48h都做了），還是遷移不下去，一個細胞都沒遷移到下室... 按理說10%的血清應該很明顯能發(fā)生遷移吧（不會是血清過低），所有看到的文獻上做MSC遷移用的也都是8微米的孔（也不會是孔太�。� 我也按照操作步驟經(jīng)過了24h饑餓處理的，上室細胞懸液用的是無血清培基（加了0.1%BSA保持滲透壓）。 用棉簽擦的操作我也在網(wǎng)上問過，別人告訴我這個操作應該沒什么問題的…… 可是就是想不出為什么一個細胞也沒遷移下去><。我們組就我一個人做遷移實驗，其他人都沒做過，我也是第一次做在摸索，所以很無助，實驗沒法繼續(xù)做下去了... 誠懇地請教做過的前輩出來傳授一下經(jīng)驗，這個問題有可能是什么原因造成的？應該怎么解決？ 非常感謝！ |
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