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鴉米新蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
有人在做BiFC嗎？ 已有16人參與
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| 因?yàn)槲医谝鯞iFC,我們實(shí)驗(yàn)室之前沒(méi)有人做過(guò)，所以想請(qǐng)教曾經(jīng)做過(guò)的朋友一些問(wèn)題，哪位做過(guò)可以交流一下嗎？ |
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starseacow
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西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-06-07 10:09:27
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西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-06-07 10:09:27
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我主要在擬南芥和煙草上做，實(shí)驗(yàn)室里也有人做原生質(zhì)體，沒(méi)什么特別要注意的，按照合適正確的protocol做就可以。做bifc，還是要盡可能避免背景干擾和假陽(yáng)性結(jié)果。 我希望你把問(wèn)題列出來(lái)而不是私下交流，是為了給其他蟲(chóng)友一些可參考的信息。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
5樓2014-06-05 15:08:29
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11樓2014-06-07 02:36:20
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你好，我最近在做BiFC，陰性對(duì)照也有熒光，而且很亮很多，我得陰性對(duì)照是兩個(gè)空載體，請(qǐng)問(wèn)這種情況你是怎么解決的，希望能幫我解答一下，謝謝 |
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qingfeng201133樓2014-08-16 13:34:12
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47樓2016-01-05 17:02:12
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你們是轉(zhuǎn)的擬南芥原生質(zhì)體嗎？操作上有什么需要注意的嗎？ 4樓2014-06-05 08:25:54
鴉米
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7樓2014-06-05 17:09:05
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8樓2014-06-05 18:59:34
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9樓2014-06-07 02:27:04
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西門(mén)吹雪170: 金幣+3, 應(yīng)助指數(shù)+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-06-07 10:10:13
小木蟲(chóng): 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
西門(mén)吹雪170: 金幣+3, 應(yīng)助指數(shù)+1, 鼓勵(lì)回帖交流 2014-06-07 10:10:13
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有背景熒光干擾很正常，有時(shí)候尤其是做擬南芥根，什么都不賺轉(zhuǎn)植物本身也有一定的熒光信號(hào)。我們的做法是建立了一個(gè)rBiFC系統(tǒng)，在載體上單獨(dú)加上了一個(gè)RFP，這樣可以依靠RFP信號(hào)檢查農(nóng)桿菌侵染轉(zhuǎn)化效果，并用YFP／RFP比值表示結(jié)果，同時(shí)，添加一定的tag以便做western檢查表達(dá)水平。結(jié)合這些手段，可以有效抑制干擾并獲得可信結(jié)果。具體可以參考上面列出的文章。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
10樓2014-06-07 02:34:43
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