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well_想太多新蟲 (小有名氣)
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[求助]
有cds序列和全基因組序列,如何設(shè)計引物來克隆和表達(dá)! 已有4人參與
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| 我想對一個酶基因進(jìn)行克隆和表達(dá),現(xiàn)在知道這個酶基因的cds序列,以及這個菌的基因組序列,請問如果我想得到這個基因,在設(shè)計引物的時候應(yīng)該怎么做?這方面我是菜鳥,本來就想用這個cds序列兩端設(shè)計引物的,但是看大家有的說什么要找到保守序列,也有的說只用cds序列就行,只用cds的話以后會不會影響到表達(dá)呢?哎呀,我說的沒有條理,見諒啊,大家放假了,實(shí)在心里很著急,還望高手給予指導(dǎo)!越詳細(xì)越好! |
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 核酸生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2014-07-16 08:35:49
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well_想太多: 金幣+1, ★有幫助 2014-07-16 09:54:58
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一般 啟動子在起始密碼子前找。cds區(qū)克隆先提rna逆轉(zhuǎn)錄，設(shè)計cds區(qū)引物來pcr然后粗略的測測序有個底，然后通過T載體連接到質(zhì)粒上，最后導(dǎo)入目的菌里面表達(dá)，然后提出表達(dá)物來驗(yàn)證！大概思路是這樣子的。歡迎交流，我也做cds區(qū)克隆 [ 發(fā)自小木蟲客戶端 ] |
4樓2014-07-16 01:49:44
2樓2014-07-15 21:27:01
well_想太多
新蟲 (小有名氣)
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3樓2014-07-15 21:47:13
5樓2014-07-16 01:51:34
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