質(zhì)粒PCR產(chǎn)物片段大小問題
質(zhì)粒為pUC57的大腸桿菌，質(zhì)粒提取用的是自制試劑盒，經(jīng)電泳過后確定是pUC57，然后用的是50μl的Taq體系進行的PCR擴增，引物自設(shè)的，將產(chǎn)物進行電泳時發(fā)現(xiàn)有兩種不同的情況。其一是得到了400+的片段（此片段為正常片段），但同時做的相關(guān)平行組還得到了6000左右的片段。有沒有相關(guān)PCR通透者可以解釋一下，這個6000左右的片段會產(chǎn)生的原因？以及這個6000的片段是否正常？
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京公網(wǎng)安備 11010802022153號
有非特異性很正常，PCR不能說明問題。
例如，引物特異性不好，或者退火溫度過低，延伸時間過長都會出現(xiàn)非特異性條帶，
只要有目標條帶就可以了。
如果你想再檢測，建議提高退火溫度，質(zhì)粒為模板，退火溫度高點沒事；延伸時間掌控在目標條帶范圍；另外，模板稀釋10倍或50倍。
你這個載體多大，是不是轉(zhuǎn)了一圈了？這種事常有
所有條件都是設(shè)計好的，已經(jīng)是最優(yōu)的了，如上述說的，部分組出現(xiàn)的是正常地，另一組出現(xiàn)的差異性很大，所以，想知道，在這個過程中，出現(xiàn)這么大片段的原因，是想知道，在怎樣的情況下會出現(xiàn)這種情況，是所有產(chǎn)物連在一起了么？
載體是2710bp的。
難道轉(zhuǎn)了兩圈？
如果加上目標基因長度只有2.7k，擴出6k的非特異性條帶，不可能什么轉(zhuǎn)不轉(zhuǎn)了兩圈的。
很有可能是引物，水，或者酶被污染。
很明確告訴你，不可能是所有產(chǎn)物連在一起。什么轉(zhuǎn)了一圈不一圈的，不要相信那些胡言亂語。我最討厭不懂裝懂。
你延伸時間多長擴出6K的片段？你延伸400左右的片段擴出這么長的，不可能轉(zhuǎn)了一圈。
如果你真想找出原因，回收，測序，兩端各測一個反應(yīng)。測序時候把自己引物帶上10ul
，