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連接轉(zhuǎn)化
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和PMD-19T載體連接 體系10 載體1 pcr產(chǎn)物4solution 1 5，4度連接過(guò)夜，然后轉(zhuǎn)化到DH5 中，一天內(nèi)都沒(méi)有長(zhǎng)菌，做了好幾次，懷疑是不是連接中有問(wèn)題，轉(zhuǎn)化后的菌液為模版做了pcr鑒定，沒(méi)有目的條帶，請(qǐng)大家指點(diǎn) 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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有可能是載體或者（和）片段都沒(méi)有處理好，重新制備載體或者（和）片段，應(yīng)該就好了。另外，載體多加些，換用16℃過(guò)夜鏈接，以前我都是這么做的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-03-01 09:38:12
3樓2016-03-01 13:39:52
mlxmiao
木蟲 (著名寫手)
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一般是膠回收產(chǎn)物濃度太低�；厥蘸煤笞詈门苣z檢測(cè)一下，別沒(méi)有回收回來(lái)。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-03-01 14:32:34
原海亮
木蟲 (著名寫手)
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首先樓主PCR擴(kuò)增選用的酶可以末端加A么？如果可以，那么最好對(duì)PCR產(chǎn)物濃度跑膠看看，同時(shí)轉(zhuǎn)化做感受態(tài)陰性對(duì)照，即不加連接產(chǎn)物的，看感受態(tài)是否有問(wèn)題。如果不可以末端加A，樓主應(yīng)該對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行加A反應(yīng)后，再同T載體連接。祝好 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-03-01 14:33:28
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TA克隆一般不會(huì)出現(xiàn)這種情況，片段濃度要高些。如果片段制備不是很麻煩的話，建議你重新做片段？另，片段大小多少？片段大的話，連上的可能會(huì)低些 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
6樓2016-03-01 16:59:03
7樓2016-03-01 17:58:49
8樓2016-03-02 11:01:04
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