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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » PCR相關 » 連接轉化
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連接轉化
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和PMD-19T載體連接 體系10 載體1 pcr產物4solution 1 5，4度連接過夜，然后轉化到DH5 中，一天內都沒有長菌，做了好幾次，懷疑是不是連接中有問題，轉化后的菌液為模版做了pcr鑒定，沒有目的條帶，請大家指點 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
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3樓2016-03-01 13:39:52
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有可能是載體或者（和）片段都沒有處理好，重新制備載體或者（和）片段，應該就好了。另外，載體多加些，換用16℃過夜鏈接，以前我都是這么做的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-03-01 09:38:12
mlxmiao
木蟲 (著名寫手)
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4樓2016-03-01 14:32:34
原海亮
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首先樓主PCR擴增選用的酶可以末端加A么？如果可以，那么最好對PCR產物濃度跑膠看看，同時轉化做感受態(tài)陰性對照，即不加連接產物的，看感受態(tài)是否有問題。如果不可以末端加A，樓主應該對PCR產物進行加A反應后，再同T載體連接。祝好 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-03-01 14:33:28
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