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[求助]
【新手】DNS法測α淀粉酶 抑制實(shí)驗(yàn) 反應(yīng)進(jìn)程曲線遇到問題
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本人是個酶方面的新手，想做某種物質(zhì)對淀粉酶的抑制作用，這是第一次，采用的是DNS法測定產(chǎn)物糖的方法。 ① 我想先做反應(yīng)進(jìn)程曲線，確定合適的酶活和反應(yīng)時間。 a. 預(yù)實(shí)驗(yàn)，1%的淀粉濃度，我選取了0.1濃度的酶，結(jié)果1-6min的OD值都是在0的上下浮動，我懷疑是淀粉酶失活了，或者濃度太低了（酶溶液一開始不懂，放在了冷藏一晚上，估計(jì)失活了） b.于是，我配置了1濃度的酶，然后配置完成立刻去測定，從1-10min的OD值都是0.5左右波動 c. 我蒙圈了，嗯，可能是酶濃度太大了，所以反應(yīng)很快，1min之內(nèi)就把所有淀粉都反應(yīng)成了糖。于是，我配置了0.6和0.3的濃度的酶，測定1-6min的OD值變化，然后0.3的不知道為什么是亂七八糟的，0.6的結(jié)果還行，1min的時候是0.2左右，但是從2min開始之后就全部都是0.5左右。 d.讓我很奔潰，合適的酶濃度和反應(yīng)時間，到底怎么才能準(zhǔn)確的測定出來，我的問題到底出在那里？？？ ② 看文獻(xiàn)，有的測定一種物質(zhì)對淀粉酶得抑制，做了陰性、陽性和空白對照，可是有的實(shí)驗(yàn)就沒有陽性對照，一定要做嗎？ ③ 看文獻(xiàn)，有一篇文獻(xiàn)的抑制劑是有有機(jī)溶劑溶解的，就是水和乙醇一定比例，那我在想，乙醇不會對酶的活性產(chǎn)生影響嗎？這篇文章科學(xué)么，居然做出來，結(jié)果很好，而且還發(fā)表了！ 求大神幫忙，我是試了好多還不出滿意結(jié)果，感覺奔潰了！ |
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4樓2016-03-11 16:11:03
★ ★ ★ ★ ★
RX_豆丁(99503102代發(fā)): 金幣+5, 謝謝熱心應(yīng)助，繼續(xù)加油！ 2016-06-30 10:51:38
RX_豆丁(99503102代發(fā)): 金幣+5, 謝謝熱心應(yīng)助，繼續(xù)加油！ 2016-06-30 10:51:38
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然后關(guān)于對照和空白，規(guī)范的話是都要做的，不過有的試劑是無色的，所以就不需要做空白，可以省掉。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-03-11 16:13:58
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然后，乙醇是否抑制酶活，作者這里是做了空白對照的，把只加有機(jī)溶劑的那組OD值減掉就好了 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
RX_豆丁6樓2016-03-11 16:14:48
之何的那片天
新蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 食品科學(xué)
2樓2016-03-10 15:52:48
3樓2016-03-11 10:09:11
7樓2016-03-11 16:16:36
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還有啊，做這種梯度實(shí)驗(yàn)最好一次性做完，就是各種梯度在一塊板子里，同時做，因?yàn)?6板對操作要求較高，如果不能確保操作，那么就一次把所有梯度全部做完，這樣的結(jié)果比較可靠 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2016-03-11 16:18:38
9樓2016-03-11 17:41:29
10樓2016-03-11 17:41:55
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