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【新手】DNS法測(cè)α淀粉酶 抑制實(shí)驗(yàn) 反應(yīng)進(jìn)程曲線遇到問(wèn)題
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本人是個(gè)酶方面的新手，想做某種物質(zhì)對(duì)淀粉酶的抑制作用，這是第一次，采用的是DNS法測(cè)定產(chǎn)物糖的方法。 ① 我想先做反應(yīng)進(jìn)程曲線，確定合適的酶活和反應(yīng)時(shí)間。 a. 預(yù)實(shí)驗(yàn)，1%的淀粉濃度，我選取了0.1濃度的酶，結(jié)果1-6min的OD值都是在0的上下浮動(dòng)，我懷疑是淀粉酶失活了，或者濃度太低了（酶溶液一開始不懂，放在了冷藏一晚上，估計(jì)失活了） b.于是，我配置了1濃度的酶，然后配置完成立刻去測(cè)定，從1-10min的OD值都是0.5左右波動(dòng) c. 我蒙圈了，嗯，可能是酶濃度太大了，所以反應(yīng)很快，1min之內(nèi)就把所有淀粉都反應(yīng)成了糖。于是，我配置了0.6和0.3的濃度的酶，測(cè)定1-6min的OD值變化，然后0.3的不知道為什么是亂七八糟的，0.6的結(jié)果還行，1min的時(shí)候是0.2左右，但是從2min開始之后就全部都是0.5左右。 d.讓我很奔潰，合適的酶濃度和反應(yīng)時(shí)間，到底怎么才能準(zhǔn)確的測(cè)定出來(lái)，我的問(wèn)題到底出在那里？？？ ② 看文獻(xiàn)，有的測(cè)定一種物質(zhì)對(duì)淀粉酶得抑制，做了陰性、陽(yáng)性和空白對(duì)照，可是有的實(shí)驗(yàn)就沒(méi)有陽(yáng)性對(duì)照，一定要做嗎？ ③ 看文獻(xiàn)，有一篇文獻(xiàn)的抑制劑是有有機(jī)溶劑溶解的，就是水和乙醇一定比例，那我在想，乙醇不會(huì)對(duì)酶的活性產(chǎn)生影響嗎？這篇文章科學(xué)么，居然做出來(lái)，結(jié)果很好，而且還發(fā)表了！ 求大神幫忙，我是試了好多還不出滿意結(jié)果，感覺奔潰了！ |
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9樓2016-03-11 17:41:29
之何的那片天
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 89
- 帖子: 1
- 在線: 7.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 4407517
- 注冊(cè): 2016-02-16
- 專業(yè): 食品科學(xué)
2樓2016-03-10 15:52:48
3樓2016-03-11 10:09:11
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請(qǐng)問(wèn)你是用96孔板測(cè)的嗎？做酶抑制反應(yīng)得注意操作條件和加樣順序啊，先把底物和緩沖體系全部加好，最后再加酶。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
4樓2016-03-11 16:11:03
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