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小胖芙芙新蟲 (初入文壇)
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[求助]
求助��！短片段（169 bp）PCR擴(kuò)增，用Takara La Taq酶，不出條帶呀。。。。 已有5人參與
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 小白第一次發(fā)帖，各位大神見(jiàn)諒。。。。以前用普通的2×Taq PCR Mix擴(kuò)增，它含的酶是Taq DNA Polymerase，擴(kuò)增條帶是169 bp，當(dāng)時(shí)可以出條帶，亮度可以。也送測(cè)了的，返回結(jié)果有的位點(diǎn)是雙峰。 因?yàn)樘岬腄NA是混合物，現(xiàn)在想做克隆看看混合物的成分，就換成了Takara的La taq，但是不出條帶了呀。。。引物沒(méi)變，PCR條件也沒(méi)變。。。。 我的條件是這樣的： （1）94℃ 5min （2）94℃ 30s （3）51 ℃ 30s （4）72℃ 45s （5）（2）-（4）39 （6）72℃ 10min （7）4℃ forever 求各位大神幫幫忙，看看有沒(méi)有啥問(wèn)題啊。。。。   有啥沒(méi)說(shuō)到的，各位大神盡管問(wèn)。。。。。 |
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yilberg
新蟲 (小有名氣)
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4樓2016-03-06 08:38:41
dragonhmw
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2樓2016-03-06 07:24:03
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3樓2016-03-06 07:43:36
jackyoung
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重新摸索條件是正道，這么點(diǎn)兒的片段用LA Taq有點(diǎn)兒浪費(fèi)了。Anyway,最忌諱這種一個(gè)條件P到底的情況。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-03-06 08:45:55
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