 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 3987 | 回復(fù): 20 | ||
小胖芙芙新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
求助�。《唐危�169 bp）PCR擴(kuò)增，用Takara La Taq酶，不出條帶呀。。。。 已有5人參與
|
 小白第一次發(fā)帖，各位大神見諒。。。。以前用普通的2×Taq PCR Mix擴(kuò)增，它含的酶是Taq DNA Polymerase，擴(kuò)增條帶是169 bp，當(dāng)時(shí)可以出條帶，亮度可以。也送測(cè)了的，返回結(jié)果有的位點(diǎn)是雙峰。 因?yàn)樘岬腄NA是混合物，現(xiàn)在想做克隆看看混合物的成分，就換成了Takara的La taq，但是不出條帶了呀。。。引物沒變，PCR條件也沒變。。。。 我的條件是這樣的： （1）94℃ 5min （2）94℃ 30s （3）51 ℃ 30s （4）72℃ 45s （5）（2）-（4）39 （6）72℃ 10min （7）4℃ forever 求各位大神幫幫忙，看看有沒有啥問題啊。。。。   有啥沒說到的，各位大神盡管問。。。。。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
蛋白質(zhì)檢測(cè)：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有91人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有15人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
dragonhmw
鐵桿木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 10423.3
- 散金: 65
- 紅花: 40
- 帖子: 806
- 在線: 351.3小時(shí)
- 蟲號(hào): 1565043
- 注冊(cè): 2012-01-05
- 性別: GG
- 專業(yè): 獸醫(yī)傳染病學(xué)
2樓2016-03-06 07:24:03
fudan671
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 3 (幼兒園)
- 金幣: 2149.1
- 散金: 335
- 紅花: 7
- 帖子: 1343
- 在線: 45小時(shí)
- 蟲號(hào): 4075866
- 注冊(cè): 2015-09-16
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物學(xué)
3樓2016-03-06 07:43:36
yilberg
新蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 1 (幼兒園)
- 金幣: 851.7
- 散金: 61
- 帖子: 71
- 在線: 8.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 3433143
- 注冊(cè): 2014-09-22
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
4樓2016-03-06 08:38:41
jackyoung
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 9 (幼兒園)
- 金幣: 3507.7
- 散金: 60
- 紅花: 23
- 帖子: 670
- 在線: 91.7小時(shí)
- 蟲號(hào): 799178
- 注冊(cè): 2009-06-26
- 性別: GG
- 專業(yè): 園藝學(xué)與植物營(yíng)養(yǎng)學(xué)
|
重新摸索條件是正道，這么點(diǎn)兒的片段用LA Taq有點(diǎn)兒浪費(fèi)了。Anyway,最忌諱這種一個(gè)條件P到底的情況。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-03-06 08:45:55
hanxiaominhu
至尊木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 126 (高中生)
- 金幣: 25793.4
- 散金: 127
- 紅花: 14
- 帖子: 2978
- 在線: 846.8小時(shí)
- 蟲號(hào): 1526260
- 注冊(cè): 2011-12-06
- 性別: GG
- 專業(yè): 生物化學(xué)
6樓2016-03-06 08:46:12
張凡云
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 13417.9
- 散金: 3094
- 紅花: 13
- 帖子: 4109
- 在線: 1485小時(shí)
- 蟲號(hào): 2426111
- 注冊(cè): 2013-04-19
- 專業(yè): 生物物理、生物化學(xué)與分子
|
第一點(diǎn)，雙峰的結(jié)果是不是你想要的結(jié)果？不是的話，麻煩你的引物重新設(shè)計(jì)，不夠特異性，第二點(diǎn)，你可以用高保真酶就可以啊，La酶是長(zhǎng)片段擴(kuò)增用的吧？ 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
7樓2016-03-06 09:07:56
原海亮
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 232 (大學(xué)生)
- 金幣: 4607.4
- 散金: 3521
- 紅花: 33
- 帖子: 1804
- 在線: 375.4小時(shí)
- 蟲號(hào): 1392705
- 注冊(cè): 2011-09-06
- 性別: GG
- 專業(yè): 微生物生理與生物化學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
|
不到200的片段用普通酶應(yīng)該可以拿到正確的序列的，突變率還是比較低的，對(duì)于你測(cè)序是雙峰，不知道你送測(cè)的樣品是什么？測(cè)序結(jié)果一點(diǎn)正確的都沒有？如果是PCR產(chǎn)物，建議將pcr產(chǎn)物進(jìn)行膠回收或者過柱純化后測(cè)序，另一個(gè)辦法即將pcr產(chǎn)物連接到T載體測(cè)序。另外實(shí)驗(yàn)中不同的酶更換后，條件還是要重新摸索的，特別退火溫度，因?yàn)榻?jīng)常會(huì)出現(xiàn)普通酶可以而高保真的酶不行。我不太清楚第二種酶的延伸速度，不到200的片段應(yīng)該不用那么長(zhǎng)延伸時(shí)間吧，循環(huán)數(shù)也適當(dāng)減少些，祝好！ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
8樓2016-03-06 09:12:52
小胖芙芙
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 135
- 帖子: 8
- 在線: 3.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 2434850
- 注冊(cè): 2013-04-24
- 專業(yè): 植物生理與生化
|
溶液體系是: LA Taq 0.25微升 pcr buffer 2.5微升 dNTP Mix 2微升 primers 1/1微升 ddH2O 17.25微升 DNA 1微升 對(duì)了，LA taq是125U的 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
9樓2016-03-06 10:06:20
小胖芙芙
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 135
- 帖子: 8
- 在線: 3.2小時(shí)
- 蟲號(hào): 2434850
- 注冊(cè): 2013-04-24
- 專業(yè): 植物生理與生化
送紅花一朵 |
開始想的是用LA就可以不用單獨(dú)加A尾了，它確實(shí)是擴(kuò)長(zhǎng)的，以前用它擴(kuò)過500bp的片段是沒有問題的。循環(huán)數(shù)我也試著降一下吧，謝謝。。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2016-03-06 10:16:41
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 小胖芙芙 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 食品工程專碩一志愿中海洋309求調(diào)劑 +3 | 小張zxy張 2026-03-26 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料與化工085600，總分304，本科有兩篇sci參與，求調(diào)劑 +10 | 幸運(yùn)的醬醬 2026-03-22 | 12/600 |
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +5 | 十閑wx 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 林之夕 2026-03-24 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 349求調(diào)劑 +5 | 杰斯塔里斯 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿鄭州大學(xué)，080500學(xué)碩，總分317分求調(diào)劑 +4 | 舉個(gè)栗子oi 2026-03-24 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿華理，數(shù)一英一285求A區(qū)調(diào)劑 +8 | AZMK 2026-03-25 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +6 | 紅衣隱官 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研]
 085602化學(xué)工程求調(diào)劑。
+4
|
平樂樂樂 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 尋找調(diào)劑 +5 | 倔強(qiáng)芒? 2026-03-21 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 材料與化工328分調(diào)劑 +6 | 。，。，。，。i 2026-03-23 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +3 | 李李不服輸 2026-03-25 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 318求調(diào)劑 +5 | plum李子 2026-03-21 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿南航材料專317分求調(diào)劑 +5 | 炸呀炸呀炸薯?xiàng)l 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 291求調(diào)劑 +3 | HanBeiNingZC 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 材料專碩331求調(diào)劑 +4 | 鮮當(dāng)牛 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿山東大學(xué)藥學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +3 | 開開心心沒煩惱 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 384求調(diào)劑 +3 | 子系博 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 269求調(diào)劑 +4 | 我想讀研11 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[論文投稿] 急發(fā)核心期刊論文 +3 | 賢達(dá)問津 2026-03-23 | 5/250 |
|