 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 799 | 回復: 4 | |||
我是胡子新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
求助，急，跪謝！ 已有3人參與
|
|
我準備在大腸桿菌中異源表達并純化Methanosarcina acetivorans中的acetate kinase （基因locus number為MA3606），請問： 1）該基因稀有密碼子含量如何？我該使用什么蛋白表達菌株？ 2）選擇一種pET載體，使該異源表達的蛋白帶上C末端的His tag。 3）設計一個純化方法，將該蛋白純化（注明用什么buffer，什么色譜柱，什么流速，柱與柱之間需要進行什么處理，如何檢測蛋白等）。 |
回復此樓» 猜你喜歡
本人考085602 化學工程 專碩
已經(jīng)有23人回復
-
求調(diào)劑院校信息
已經(jīng)有4人回復
-
085600材料與化工306
已經(jīng)有4人回復
-
286求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復
-
328求調(diào)劑，英語六級551，有科研經(jīng)歷
已經(jīng)有9人回復
-
一志愿北京化工大學070300 學碩336求調(diào)劑
已經(jīng)有4人回復
-
286分人工智能專業(yè)請求調(diào)劑愿意跨考！
已經(jīng)有8人回復
-
資源與環(huán)境 調(diào)劑申請(333分)
已經(jīng)有5人回復
-
280求調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復
-
269專碩求調(diào)劑
已經(jīng)有5人回復
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 求助，化合物名稱，急用
已經(jīng)有2人回復
- 急�。。。。。。。。。�！求助剝落試驗腐蝕等級評定（鋁合金攪拌摩擦焊焊接接頭）
已經(jīng)有2人回復
- 急！求化合物CAS號，跪謝�。。�(4-十二烷基吡啶，4-十四烷基吡啶，4-十六烷基吡啶，4-
已經(jīng)有4人回復
- 高分求助空心球不閉合原因，急等
已經(jīng)有10人回復
- 求助一篇文獻，各位親幫忙，急用�。。。�
已經(jīng)有0人回復
- 印染助劑資源求助，哪位大神幫忙一下，急！
已經(jīng)有3人回復
- 如何分離二氯甲烷，三乙胺，水，雜質(zhì)？求其具體的分離工藝！跪求！先謝過了！急！
已經(jīng)有5人回復
- 【求助】急�。。。∏笾魑淮笊耜P(guān)于動脈用藥與靜脈用藥的幾個問題�。。。」蛑x！
已經(jīng)有0人回復
- 急！ 求助 SPSS 線性回歸得到的系數(shù)帶入公式計算的結(jié)果與SPSS中預測值不一致!!!!
已經(jīng)有6人回復
- AspenONEV8-2安裝總是失敗，求助，急！
已經(jīng)有4人回復
- 求助合成酰胺的問題，急
已經(jīng)有9人回復
- 求助北海道大學鑄造梯隊和九州大學SOFC，PEFC梯隊華人博士聯(lián)系方式，急用，謝謝了
已經(jīng)有6人回復
- 求助，超急，研究阻燃的請進�。�！
已經(jīng)有46人回復
- 急求助，在線等答案�。。�！寧夏大學學報自然科學版
已經(jīng)有15人回復
- Rosetta求助！�。〖�
已經(jīng)有0人回復
- 求煤粉或鑄造粉項目的環(huán)評報告模板,跪謝!急急急!
已經(jīng)有2人回復
- 【投稿求助】急�。�！求助，投稿JACS都快一周了，還沒有with editor 是怎么意思啊
已經(jīng)有5人回復
- 【求助】急�。。∪A科同濟藥理考藥理和生理，沒有提供指定參考書，請了解的師兄師姐幫
已經(jīng)有0人回復
【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
|
簡單理解一下問題就是：我該如何表達一個蛋白？樓主你沒經(jīng)驗吧，應該是沒做過，，， 沒做過的知道分析稀有密碼子含量很不錯， 1.稀有密碼子含量，你可以自己分析，你不是在大腸桿菌表達系統(tǒng)嘛，大腸桿菌有自己喜歡和不喜歡的密碼子網(wǎng)上一查就知道了（就是密碼子優(yōu)化的步驟）除此之外除了優(yōu)化密碼子還有mRNA結(jié)構(gòu)優(yōu)化，這就你自己搞了不同的公司有不同的技術(shù)（應該屬于機密了吧）； 2. 你應該用什么表達菌株，一般正常情況下 BL21（DE3）就可以了，當然如有表達的蛋白有毒性或者其他特性就另說了（可以看下這篇文章，http://www.detaibio.com/topics/yuan-he-biao-da-faq.html，看原核表達FAQ那個，7 8M的打開會有點慢，里面說的挺好）； 3. 你是原核表達 pet系列你都可以選擇，帶上his也很正常有利于純化嗎，親和純化哈 4. 純化方法？你都his了，當然親和純化，至于你說的什么流速什么buffer什么色譜柱，這個。。。。這都需要有蛋白純化工作經(jīng)驗至少一兩年以上的才能準確回答你，這些因素就是實驗摸索的一個過程，恰恰是最重要的，針對不同的蛋白性質(zhì)也不一樣，所以沒有固定答案，你還是好好學習親和純化原理，如何大概操作步驟，中間的試劑等等自己摸索，純化有時候buffer不對，結(jié)果都會千差萬別的，有時候還包涵體更麻煩，上清就好些了 5.檢測蛋白，檢測蛋白比較簡單，跑SDS-PAGE就可以，你的蛋白大小多大你是知道的，只需要在膠上面看看有沒有表達就行，沒有表達那就不好辦了，原因多種更要摸索，如果表達量低，可以在做Western blot定性一下，看看到底有沒有，實在不放心也可以切膠測序嗎，，，提供一些資料：祝好運，資料如下： 蛋白表達系統(tǒng)介紹：原核酵母哺乳動物系統(tǒng)/原理/操作步驟/FAQ SDS=PAGR實驗原理/操作步驟/相關(guān)FAQ Western blot實驗原理/操作步驟/相關(guān)FAQ 原核表達FAQ包括蛋白不表達，蛋白表達不在上清 蛋白純化：http://wenku.baidu.com/view/521ff9cec281e53a5902ff27 |
2樓2016-03-18 16:06:49
【答案】應助回帖
|
蛋白表達系統(tǒng)原核/真核/酵母/哺乳動物系統(tǒng)/原理/操作步驟/FAQ：http://www.detaibio.com/topics/dan-bai-biao-da.html 蛋白不表達，蛋白表達不在上清：http://www.detaibio.com/topics/yuan-he-biao-da-faq.html SDS-PAGE實驗原理/步驟/FAQ：http://www.detaibio.com/topics/sds-page-technology.html Western blot原理實驗操作FAQ：http://www.detaibio.com/material-western-blot.html |
3樓2016-03-18 16:10:40
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
nono2009: 金幣-20, 屏蔽內(nèi)容, 違規(guī)存檔, 注冊商家也只能在廣告區(qū)發(fā)廣告，其它區(qū)發(fā)廣告仍屬違規(guī) 2016-05-05 21:50:08
nono2009: 金幣-20, 屏蔽內(nèi)容, 違規(guī)存檔, 注冊商家也只能在廣告區(qū)發(fā)廣告，其它區(qū)發(fā)廣告仍屬違規(guī) 2016-05-05 21:50:08
|
本帖內(nèi)容被屏蔽 |
4樓2016-05-04 11:43:08
hc-material
專家顧問 (職業(yè)作家)
-
專家經(jīng)驗: +702 - BioEPI: 1
- 應助: 517 (博士)
- 金幣: 462.9
- 散金: 18028
- 紅花: 313
- 帖子: 3594
- 在線: 518.8小時
- 蟲號: 4027804
- 注冊: 2015-08-18
- 性別: GG
- 專業(yè): 核技術(shù)及其應用
- 管轄: 生物科學
問題太多了，太寬泛。his taq融合蛋白都用鎳螯合高流速瓊脂糖凝膠純化。具體買填料會有說明書。祝順利。 5樓2016-05-13 15:57:17
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 我是胡子 的主題更新
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 286求調(diào)劑 +10 | Faune 2026-03-21 | 10/500 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料學碩301分求調(diào)劑 +7 | Liyouyumairs 2026-03-21 | 7/350 |
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | 十三加油 2026-03-21 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +9 | 煙火先于春 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 297求調(diào)劑 +11 | 戲精丹丹丹 2026-03-17 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +4 | 某某某某位 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[基金申請]
學校已經(jīng)提交到NSFC，還能修改嗎？
 40+4
|
babangida 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0856材料專碩353求調(diào)劑 +3 | NIFFFfff 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 初始318分求調(diào)劑（有工作經(jīng)驗） +3 | 1911236844 2026-03-17 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 化學求調(diào)劑 +4 | 臨澤境llllll 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研]
 271材料工程求調(diào)劑
+8
|
.6lL 2026-03-18 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交大，求調(diào)劑 +5 | 材化逐夢人 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿中南化學（0703）總分337求調(diào)劑 +8 | niko- 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研] A區(qū)線材料學調(diào)劑 +5 | 周周無極 2026-03-20 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿西南交通 專碩 材料355 本科雙非 求調(diào)劑 +5 | 西南交通專材355 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿西安交通大學 學碩 354求調(diào)劑211或者雙一流 +3 | 我想要讀研究生 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 319求調(diào)劑 +3 | 小力氣珂珂 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 環(huán)境工程調(diào)劑 +9 | 大可digkids 2026-03-16 | 9/450 |
|
|
|
[考研]
11408 一志愿西電，277分求調(diào)劑
+3
|
zhouzhen654 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 機械專碩325，尋找調(diào)劑院校 +3 | y9999 2026-03-15 | 5/250 |
|