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xianglixie3銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
primerstar PCR沒(méi)有條帶是為什么呢？ 已有3人參與
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如題，我用Cdna 擴(kuò)增表達(dá)片段大概2000-3000bp。 Cdna 沒(méi)有問(wèn)題，擴(kuò)增了tub 有帶。 我用Taq 酶擴(kuò)增的時(shí)候有帶，因?yàn)椴皇歉弑Ｕ娴拿杆晕蚁胗胮rimerstar 獲得片段 試過(guò)加了6%DMSO 試過(guò) 降低退火溫度 本來(lái)的退火溫度是67 降到了62 還是沒(méi)有條帶 延伸時(shí)間用的2-3min 求解! 我都整了一個(gè)月了 沒(méi)有帶呀 要死要活的。 |
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7樓2016-03-18 12:06:05
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
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xianglixie3: 金幣+5, ★★★很有幫助, 終于擴(kuò)出來(lái)了 回收之后也超級(jí)亮 謝謝 2016-03-19 08:06:38
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xianglixie3: 金幣+5, ★★★很有幫助, 終于擴(kuò)出來(lái)了 回收之后也超級(jí)亮 謝謝 2016-03-19 08:06:38
| cDNA擴(kuò)增長(zhǎng)片段是有各種問(wèn)題的，模板質(zhì)量得好，濃度合適；選用合適的酶；引物質(zhì)量合格，高保真酶是應(yīng)該用高退火的，你可以按照酶的說(shuō)明書(shū)試驗(yàn)一下，擴(kuò)增效率2000bp/min吧？不用那么長(zhǎng)時(shí)間。 |
2樓2016-03-18 09:46:30
xianglixie3
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3樓2016-03-18 09:53:24
4樓2016-03-18 09:58:53
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5樓2016-03-18 10:20:24
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6樓2016-03-18 11:24:32
xianglixie3
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8樓2016-03-18 14:28:13
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9樓2016-03-18 15:31:56
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10樓2016-03-19 08:07:15
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