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xianglixie3

銅蟲(chóng) (小有名氣)

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[求助] primerstar PCR沒(méi)有條帶是為什么呢？已有3人參與

如題，我用Cdna 擴(kuò)增表達(dá)片段大概2000-3000bp。
Cdna 沒(méi)有問(wèn)題，擴(kuò)增了tub 有帶。
我用Taq 酶擴(kuò)增的時(shí)候有帶，因?yàn)椴皇歉弑Ｕ娴拿杆晕蚁胗胮rimerstar 獲得片段
試過(guò)加了6%DMSO 試過(guò) 降低退火溫度本來(lái)的退火溫度是67 降到了62 還是沒(méi)有條帶
延伸時(shí)間用的2-3min
求解!
我都整了一個(gè)月了沒(méi)有帶呀要死要活的。

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1樓 2016-03-18 08:38:35

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310013

金蟲(chóng) (小有名氣)

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【答案】應(yīng)助回帖

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西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-03-19 08:50:50

Takara PrimeSTAR HS DNA Polymerase?我也用這個(gè)，效果不錯(cuò)。無(wú)需預(yù)變性及最后延伸這兩步，直接進(jìn)行循環(huán)。不過(guò)退火時(shí)間與退火溫度有關(guān)，你按說(shuō)明書來(lái)操作。它的延伸效率是 1kb/min。祝實(shí)驗(yàn)順利

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7樓2016-03-18 12:06:05

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卡維斯

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xianglixie3: 金幣+5, ★★★很有幫助, 終于擴(kuò)出來(lái)了回收之后也超級(jí)亮謝謝 2016-03-19 08:06:38

cDNA擴(kuò)增長(zhǎng)片段是有各種問(wèn)題的，模板質(zhì)量得好，濃度合適；選用合適的酶；引物質(zhì)量合格，高保真酶是應(yīng)該用高退火的，你可以按照酶的說(shuō)明書試驗(yàn)一下，擴(kuò)增效率2000bp/min吧？不用那么長(zhǎng)時(shí)間。

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2樓2016-03-18 09:46:30

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xianglixie3

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引用回帖:

2樓: Originally posted by 卡維斯 at 2016-03-18 09:46:30
cDNA擴(kuò)增長(zhǎng)片段是有各種問(wèn)題的，模板質(zhì)量得好，濃度合適；選用合適的酶；引物質(zhì)量合格，高保真酶是應(yīng)該用高退火的，你可以按照酶的說(shuō)明書試驗(yàn)一下，擴(kuò)增效率2000bp/min吧？不用那么長(zhǎng)時(shí)間。

你的意思說(shuō) 它的退火溫度應(yīng)該比普通酶高是嗎
我找找說(shuō)明書重新看看然后延伸時(shí)間降一些再做一次

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3樓2016-03-18 09:53:24

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引用回帖:

3樓: Originally posted by xianglixie3 at 2016-03-18 09:53:24
你的意思說(shuō) 它的退火溫度應(yīng)該比普通酶高是嗎
我找找說(shuō)明書重新看看然后延伸時(shí)間降一些再做一次

...

對(duì)，仔細(xì)研究下說(shuō)明書按他說(shuō)的就可以，加油

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4樓2016-03-18 09:58:53

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