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HX91926銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
有沒(méi)有做過(guò)巰基檢測(cè)的?求教? 已有1人參與
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我看原始文獻(xiàn)1959那篇,寫(xiě)的是60 nm dtnb加大約2000 nm 巰基,我們做的大約60 nm 巰基加大約1000 nm DTNB,但是增加樣品量,吸光度不變?但是標(biāo)曲會(huì)隨著樣品量增加?有做過(guò)的嗎? 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
銅蟲(chóng) (小有名氣)
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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研究蛋白的氧化還原活性,我們選擇谷胱甘肽為反應(yīng)底物,氧化性谷胱甘肽GSH在還原劑的作用下被還原成GSSG,GSH能和5,5'二硫代雙(2-硝基苯甲酸) DTNB反應(yīng)生成黃色產(chǎn)物2-硝基-5-硫代苯甲酸(2-nitro-5-thiobenzoic acid): (1)將表達(dá)出的蛋白充分混合后加入2.5 mM的GSH,在水浴鍋30℃左右進(jìn)行溫浴反應(yīng)30 min; (2)將DTNB加入到反應(yīng)中,充分反應(yīng)直到黃色物質(zhì)穩(wěn)定后,進(jìn)行OD412檢測(cè); (3)以2.5mM GSH加入DTNB后反應(yīng)生成2-nitro-5-thiobenzoic acid的OD412值(不加任何目的蛋白)為對(duì)照標(biāo)準(zhǔn); (4)對(duì)比(2)和(3)之間OD412值的差異; 這是之前其他人做的實(shí)驗(yàn) 僅供參考 |
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
銅蟲(chóng) (小有名氣)
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