 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 2045 | 回復(fù): 13 | ||
BESTWWZ新蟲 (初入文壇)
|
[求助]
關(guān)于質(zhì)粒構(gòu)建的疑難問題，求指點(diǎn)！�。�！ 已有2人參與
|
|
請教質(zhì)粒構(gòu)建前輩~目前我想構(gòu)建某一基因的表達(dá)載體，已從cDNA上成功調(diào)取該基因，目標(biāo)基因的大小是2000bp，想要構(gòu)建到VR1012（4900bp）這個真核表達(dá)載體上，使用PCR方法獲得酶切位點(diǎn)然后連入雙酶切的載體，PCR后核酸膠驗證目標(biāo)條帶大小正確，膠回收，同時酶切載體膠回收，將目的基因的正義鏈與反義鏈退火（94℃ 10min, 25℃ 30min），連接載體，TOP10感受態(tài)轉(zhuǎn)化后，挑單克隆，鑒定（雙酶切以及菌液PCR）發(fā)現(xiàn)目標(biāo)基因變短了！  測序發(fā)現(xiàn)基因變成了△975-1431nt缺失，少了456bp，反復(fù)了3次以上都是這樣，請問各位大牛有人知道這種情況是如何造成的？有什么方法能避免，我用相同的方法構(gòu)建了另外4個基因都沒有這樣的問題…… |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有99人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
蘭蘭園丁
木蟲 (著名寫手)
- 應(yīng)助: 27 (小學(xué)生)
- 金幣: 8437.1
- 散金: 162
- 紅花: 13
- 沙發(fā): 4
- 帖子: 2121
- 在線: 241.4小時
- 蟲號: 2989280
- 注冊: 2014-02-24
- 性別: GG
- 專業(yè): 細(xì)胞、亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)與功能
【答案】應(yīng)助回帖
★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2016-03-21 08:43:48
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
西門吹雪170: 金幣+1, 鼓勵回帖交流 2016-03-21 08:43:48
|
最大的可能就是你酶切位點(diǎn)選的不對，基因內(nèi)部可能還有一個位點(diǎn)，因此導(dǎo)致變短 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2016-03-21 00:10:09
siriusxuan
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 50 (小學(xué)生)
- 金幣: 1830
- 散金: 207
- 紅花: 7
- 帖子: 509
- 在線: 151.5小時
- 蟲號: 1992629
- 注冊: 2012-09-11
- 專業(yè): 生物化學(xué)
2樓2016-03-21 00:02:37
star013 
新蟲 (知名作家)
- 應(yīng)助: 4 (幼兒園)
- 金幣: 1488.5
- 散金: 831
- 紅花: 33
- 帖子: 5395
- 在線: 493.3小時
- 蟲號: 1401381
- 注冊: 2011-09-14
- 專業(yè): 法學(xué)
4樓2016-03-21 06:03:40
BESTWWZ
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 190.5
- 帖子: 5
- 在線: 1.9小時
- 蟲號: 4396214
- 注冊: 2016-02-06
- 性別: MM
- 專業(yè): 病毒學(xué)
5樓2016-03-21 16:19:41
BESTWWZ
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 190.5
- 帖子: 5
- 在線: 1.9小時
- 蟲號: 4396214
- 注冊: 2016-02-06
- 性別: MM
- 專業(yè): 病毒學(xué)
6樓2016-03-21 16:26:13
BESTWWZ
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 190.5
- 帖子: 5
- 在線: 1.9小時
- 蟲號: 4396214
- 注冊: 2016-02-06
- 性別: MM
- 專業(yè): 病毒學(xué)
7樓2016-03-21 16:28:11
siriusxuan
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 50 (小學(xué)生)
- 金幣: 1830
- 散金: 207
- 紅花: 7
- 帖子: 509
- 在線: 151.5小時
- 蟲號: 1992629
- 注冊: 2012-09-11
- 專業(yè): 生物化學(xué)
8樓2016-03-21 17:38:27
yvonne9044
新蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 19 (小學(xué)生)
- 金幣: 1894.6
- 紅花: 11
- 帖子: 566
- 在線: 95.8小時
- 蟲號: 2302493
- 注冊: 2013-02-26
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
9樓2016-03-24 14:04:00
海憶夢奇
新蟲 (初入文壇)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 6.5
- 散金: 5
- 帖子: 21
- 在線: 5.1小時
- 蟲號: 3063861
- 注冊: 2014-03-17
- 專業(yè): 蔬菜學(xué)與瓜果學(xué)
10樓2016-04-27 10:58:36
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 BESTWWZ 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿武理材料工程348求調(diào)劑 +5 | ￣^￣゜汗 2026-03-19 | 7/350 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 08工科 320總分 求調(diào)劑 +11 | 梨花珞晚風(fēng) 2026-03-17 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑院校信息 +6 | CX 330 2026-03-21 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 初試 317 +7 | 半拉月丙 2026-03-20 | 7/350 |
|
|
|
[考研]
 一志愿東華大學(xué)控制學(xué)碩320求調(diào)劑
+3
|
Grand777 2026-03-21 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +4 | 要好好無聊 2026-03-21 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 313求調(diào)劑 +4 | 肆叁貳壹22 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 265求調(diào)劑 +12 | 梁梁校校 2026-03-19 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 22 350 本科985求調(diào)劑，求老登收留 +3 | 李軼男003 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 279分求調(diào)劑 一志愿211 +14 | chaojifeixia 2026-03-19 | 15/750 |
|
|
|
[考研] 一志愿山大07化學(xué) 332分 四六級已過 本科山東雙非 求調(diào)劑！ +3 | 不想理你 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +10 | yy要上岸呀 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +4 | ydfyh 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +4 | 小材化本科 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 317求調(diào)劑 +5 | 申子申申 2026-03-19 | 9/450 |
|
|
|
[考研]
材料與化工 322求調(diào)劑
+4
|
然11 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 工科材料085601 279求調(diào)劑 +7 | 困于星晨 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿中國海洋大學(xué)，生物學(xué)，301分，求調(diào)劑 +5 | 1孫悟空 2026-03-17 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑，一志愿華南理工大學(xué)071005 +5 | ioodiiij 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風(fēng)就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|