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雙熒光素酶報(bào)告基因問題 LUC REN 已有1人參與
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1個(gè)轉(zhuǎn)錄因子，1個(gè)啟動(dòng)子，想要研究轉(zhuǎn)錄因子對(duì)啟動(dòng)子的調(diào)控。 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)： 1、構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子過表達(dá)載體，TF 2、構(gòu)建啟動(dòng)子+LUC載體，p 3、單獨(dú)的一個(gè)載體，REN海腎熒光素酶載體作為內(nèi)參，ren 4、35sTF+p+ren 35s空載+p+ren 3個(gè)載體共轉(zhuǎn)化擬南芥原生質(zhì)體，使用Promega試劑盒，單管測(cè)LUC，REN熒光，不是用的酶標(biāo)儀。 結(jié)果：不同樣品之間，海腎熒光素酶REN的值差別挺大，最小的500，最大的10000�？瞻讓�(duì)照（原生質(zhì)體沒有加質(zhì)粒，后面步驟一樣的），100左右，所以轉(zhuǎn)化是成功了吧。 問題：理論上來(lái)說，不同樣品之間的REN值應(yīng)該差不多的啊，感覺操作也沒啥問題，差異這么大，可能的原因有哪些？ 謝謝啦～ |
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小崔姐姐03
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4樓2016-05-07 15:55:05
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質(zhì)粒間產(chǎn)生cross talk導(dǎo)致，可換成pGl4 Renilla-TK的載體，并對(duì)轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒，F(xiàn)irefly和Renilla質(zhì)粒做優(yōu)化 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-06-14 22:16:24
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6樓2016-08-15 12:58:03
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7樓2017-02-21 12:16:01
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老師你好，我也在做這方面的實(shí)驗(yàn)，我想問一下，這個(gè)熒光素酶報(bào)告基因的是用什么儀器檢測(cè)的，可以用酶標(biāo)儀嗎？還是熒光顯微鏡，如果是熒光顯微鏡的話，是普通的就可以還是的用倒置的？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2017-02-27 22:07:05
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