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雙熒光素酶報告基因問題 LUC REN 已有1人參與
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1個轉(zhuǎn)錄因子,1個啟動子,想要研究轉(zhuǎn)錄因子對啟動子的調(diào)控。 實驗設(shè)計: 1、構(gòu)建轉(zhuǎn)錄因子過表達(dá)載體,TF 2、構(gòu)建啟動子+LUC載體,p 3、單獨的一個載體,REN海腎熒光素酶載體作為內(nèi)參,ren 4、35sTF+p+ren 35s空載+p+ren 3個載體共轉(zhuǎn)化擬南芥原生質(zhì)體,使用Promega試劑盒,單管測LUC,REN熒光,不是用的酶標(biāo)儀。 結(jié)果:不同樣品之間,海腎熒光素酶REN的值差別挺大,最小的500,最大的10000?瞻讓φ眨ㄔ|(zhì)體沒有加質(zhì)粒,后面步驟一樣的),100左右,所以轉(zhuǎn)化是成功了吧。 問題:理論上來說,不同樣品之間的REN值應(yīng)該差不多的啊,感覺操作也沒啥問題,差異這么大,可能的原因有哪些? 謝謝啦~ |
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質(zhì)粒間產(chǎn)生cross talk導(dǎo)致,可換成pGl4 Renilla-TK的載體,并對轉(zhuǎn)錄因子質(zhì)粒,F(xiàn)irefly和Renilla質(zhì)粒做優(yōu)化 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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