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[求助]
關(guān)于PLGA微球制備的問(wèn)題 已有3人參與
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本人第一次做微球，有好多問(wèn)題想求助于各位大神，各位見(jiàn)笑了。 用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備載蛋白的PLGA微球，外水相用PVA, 用紫外法測(cè)定蛋白的含量。做蛋白標(biāo)曲的時(shí)候，是不是要用相應(yīng)濃度的PVA溶液做空白啊， 我是這樣做標(biāo)曲的，大家看這樣對(duì)嗎？ 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 蛋白 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 ml 5%PVA 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 ML 水 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 ml 按照文獻(xiàn)的步驟做到揮發(fā)完二氯甲烷后，離心，然后取上清液，測(cè)游離蛋白的吸光度，根據(jù)標(biāo)曲計(jì)算游離藥物的含量， 包封率=（總的投藥量-游離藥物量）/總投藥量*100% 這時(shí)，用紫外測(cè)游離蛋白的吸光度時(shí)，是不是也應(yīng)以相應(yīng)濃度的PVA溶液做空白對(duì)照呢？紫外特別不穩(wěn)呀，有時(shí)計(jì)算包封率都成了負(fù)值…… 現(xiàn)在腦子感覺(jué)轉(zhuǎn)不過(guò)彎了，希望各位給以指正指導(dǎo)。謝謝啦 |
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你好，謝謝回復(fù)，我還是有些疑問(wèn)。 我做標(biāo)曲時(shí)，蛋白的濃度從小到大是 0.0077、0.0154、0.0231、0.0308、0.0385、0.0462、0.0539、0.0616、0.0693 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程是y=7.0519x+0.04472 然后制備微球，考察單因素，比如，用3%PVA做外水相時(shí)，就取1ml 3%PVA做空白對(duì)照，加考馬斯亮藍(lán)5ml，然后取上清液，測(cè)定吸光度。有時(shí)測(cè)出的吸光度為0.034，根本就沒(méi)法帶入方程呀。而且吸光度在0.2-0.8才穩(wěn)定。而我測(cè)得的吸光度都是0.0幾的。超過(guò)0.2的計(jì)算出來(lái)的游離藥量就超過(guò)總的投藥量了。  不好意思，表述的可能不清楚，希望能幫我指正哪些步驟做錯(cuò)了。謝謝了 |
3樓2016-03-31 16:13:00
wpk9904
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首先，你制作標(biāo)曲時(shí)，你要確定你標(biāo)曲的精密度，明白嗎？后面的結(jié)果很容易出現(xiàn)負(fù)值的原因是：前面的標(biāo)曲適用方位太大了，例如適合蛋白的濃度為1-100 mg/ml，但你后面測(cè)游離時(shí)由于被稀釋了很多倍，導(dǎo)致游離藥物的濃度可能只有0.1，此時(shí)你把它帶入標(biāo)曲就很容易出現(xiàn)問(wèn)題，這是不可以的。 對(duì)于要不要加PVA溶液做空白，我的建議是前后保持一致吧，如果加整個(gè)實(shí)驗(yàn)都加，如果不加，整個(gè)實(shí)驗(yàn)就都別加。如果沒(méi)有明顯的吸光度，和水一樣，就不用加了 |
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2樓2016-03-30 08:12:24
wpk9904
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你所述說(shuō)的情況我以前遇到過(guò)。的確吸光度過(guò)低時(shí)沒(méi)有辦法的，超出了紫外分光光度計(jì)的使用范圍。所以針對(duì)該儀器我沒(méi)有很好的建議。但還是有一些替代辦法的。 我不知道你們實(shí)驗(yàn)室有沒(méi)有核酸蛋白檢測(cè)儀，就是與凝膠色譜柱相連的一種儀器。它的原理和紫外分光光度計(jì)的原理是一樣的，而且測(cè)定你這個(gè)絕對(duì)沒(méi)問(wèn)題，有的話恭喜你。 沒(méi)有的話你只能換其他包封率的測(cè)定方法了。高效液相也可以，就是太麻煩。 |
4樓2016-03-31 23:16:11
歐陽(yáng)626
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