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[求助]
關(guān)于PLGA微球制備的問題 已有3人參與
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本人第一次做微球，有好多問題想求助于各位大神，各位見笑了。 用復(fù)乳溶劑揮發(fā)法制備載蛋白的PLGA微球，外水相用PVA, 用紫外法測定蛋白的含量。做蛋白標(biāo)曲的時(shí)候，是不是要用相應(yīng)濃度的PVA溶液做空白啊， 我是這樣做標(biāo)曲的，大家看這樣對嗎？ 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 蛋白 0 0.1 0.2 0.3 0.4 0.5 0.6 0.7 0.8 0.9 ml 5%PVA 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 0.1 ML 水 0.9 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 ml 按照文獻(xiàn)的步驟做到揮發(fā)完二氯甲烷后，離心，然后取上清液，測游離蛋白的吸光度，根據(jù)標(biāo)曲計(jì)算游離藥物的含量， 包封率=（總的投藥量-游離藥物量）/總投藥量*100% 這時(shí)，用紫外測游離蛋白的吸光度時(shí)，是不是也應(yīng)以相應(yīng)濃度的PVA溶液做空白對照呢？紫外特別不穩(wěn)呀，有時(shí)計(jì)算包封率都成了負(fù)值…… 現(xiàn)在腦子感覺轉(zhuǎn)不過彎了，希望各位給以指正指導(dǎo)。謝謝啦 |
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4樓2016-03-31 23:16:11
wpk9904
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【答案】應(yīng)助回帖
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丁勤奮: 金幣+10, ★★★很有幫助 2016-03-30 14:51:21
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首先，你制作標(biāo)曲時(shí)，你要確定你標(biāo)曲的精密度，明白嗎？后面的結(jié)果很容易出現(xiàn)負(fù)值的原因是：前面的標(biāo)曲適用方位太大了，例如適合蛋白的濃度為1-100 mg/ml，但你后面測游離時(shí)由于被稀釋了很多倍，導(dǎo)致游離藥物的濃度可能只有0.1，此時(shí)你把它帶入標(biāo)曲就很容易出現(xiàn)問題，這是不可以的。 對于要不要加PVA溶液做空白，我的建議是前后保持一致吧，如果加整個(gè)實(shí)驗(yàn)都加，如果不加，整個(gè)實(shí)驗(yàn)就都別加。如果沒有明顯的吸光度，和水一樣，就不用加了 |
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2樓2016-03-30 08:12:24
送紅花一朵 |
你好，謝謝回復(fù)，我還是有些疑問。 我做標(biāo)曲時(shí)，蛋白的濃度從小到大是 0.0077、0.0154、0.0231、0.0308、0.0385、0.0462、0.0539、0.0616、0.0693 標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程是y=7.0519x+0.04472 然后制備微球，考察單因素，比如，用3%PVA做外水相時(shí)，就取1ml 3%PVA做空白對照，加考馬斯亮藍(lán)5ml，然后取上清液，測定吸光度。有時(shí)測出的吸光度為0.034，根本就沒法帶入方程呀。而且吸光度在0.2-0.8才穩(wěn)定。而我測得的吸光度都是0.0幾的。超過0.2的計(jì)算出來的游離藥量就超過總的投藥量了。  不好意思，表述的可能不清楚，希望能幫我指正哪些步驟做錯(cuò)了。謝謝了 |
3樓2016-03-31 16:13:00
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