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tbdlzf新蟲 (初入文壇)
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[求助]
流式細(xì)胞儀檢測抗體染色細(xì)胞 已有1人參與
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本人在做AcMNPV病毒感染sf9昆蟲細(xì)胞實(shí)驗(yàn)，加入病毒感染3-10個(gè)小時(shí)后取樣，處理后上流式檢測，收集的細(xì)胞數(shù)是20000個(gè)，分析細(xì)胞熒光強(qiáng)度分布情況。 細(xì)胞樣是這樣處理的：1200r/min離心5min后用PBS（加0.1%NaN3、3%BSA）清洗、加固定劑、清洗、再加抗體孵育，洗一遍后檢測。處理方法都是按說明書來的，可是做了很多遍了，結(jié)果都和陰性對(duì)照結(jié)果沒什么差別。求高手指點(diǎn)！（固定劑是life technologies的FIX&PERM，抗體是santa cruz的ACV1-FITC，可以特異結(jié)合病毒上的GP64蛋白，檢測通道是FL1H） 圖中紫色部分是實(shí)驗(yàn)組，綠色線條是陰性對(duì)照。文獻(xiàn)里面兩個(gè)波峰應(yīng)該是可以錯(cuò)開的。 IMG_20160421_154037.jpg@gyesang |
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tbdlzf
新蟲 (初入文壇)
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破膜處理是按試劑說明書做的，而且非破膜組的結(jié)果也是這樣的。本人是新手，請(qǐng)問您說的感染效率對(duì)結(jié)果可能造成什么樣的影響？是說病毒還沒有感染細(xì)胞嗎？實(shí)驗(yàn)室的師兄以前做過檢測，病毒完成吸附是很快的。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2016-04-23 09:44:37
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2樓2016-04-22 22:33:49
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新蟲 (初入文壇)
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抗體是結(jié)合GP64蛋白的，也就是說理論上胞內(nèi)和胞外都應(yīng)該能結(jié)合抗體。破膜處理是有的，在固定洗滌后跟抗體一起加的破膜劑。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2016-04-22 22:53:03
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4樓2016-04-23 08:59:15
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