 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 2/1 | 返回列表 |
| 查看: 16534 | 回復(fù): 16 | ||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||
xujingyuanxu銅蟲 (正式寫手)
|
[求助]
請問關(guān)于實時熒光定量pcr實驗中重復(fù)次數(shù)的問題
|
|
|
想向各位朋友們請教一下，在發(fā)文章時，基因表達的這一部分用rtqpcr做的話是不是每個樣品最少三個生物學重復(fù)��？每個生物學重復(fù)要做4-6個重復(fù)孔么？ 其次，是不是要測的每個基因都要做一次標曲�。恐x謝 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有91人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
天津商業(yè)大學 生物與醫(yī)藥課題組招生
已經(jīng)有0人回復(fù)
wangyou136
銀蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 415.9
- 散金: 20
- 紅花: 1
- 帖子: 81
- 在線: 27小時
- 蟲號: 3481797
- 注冊: 2014-10-17
- 專業(yè): 植物生理與生化
13樓2016-05-10 10:45:04
atlanticwi
金蟲 (正式寫手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
- MolEPI: 25
- 應(yīng)助: 138 (高中生)
- 金幣: 141.2
- 散金: 350
- 紅花: 13
- 帖子: 536
- 在線: 313.2小時
- 蟲號: 1099992
- 注冊: 2010-09-15
- 專業(yè): 植物生理與生化
|
.................嗯 對于qRT-PCR來說，每次一個反應(yīng)必須有三個技術(shù)重復(fù)，這是絕對不能少的。 一般做處理，需要有生物學重復(fù)，我們一般是兩個 至于實驗重復(fù)，一般要求三次，看情況來做 不管你怎么做，Mean+/-SD (SD都應(yīng)該代表的是生物學重復(fù)，而不能用技術(shù)重復(fù)來糊弄) 如果你實驗重復(fù)較好，可以酌情做實驗重復(fù)間的Mean+/-SEM 但如果實驗重復(fù)之間趨勢一致，但基因受調(diào)控的程度波動太大，建議圖做成一次實驗重復(fù)內(nèi)的生物學重復(fù)間的Mean+/-SD，然后注明"進行了三次實驗，得到相似結(jié)果，放入的實驗結(jié)果為代表性的........"類似話語 個人意見，如有說錯，請指正 |
2樓2016-05-05 13:15:32
xujingyuanxu
銅蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1168.1
- 散金: 61
- 紅花: 3
- 帖子: 524
- 在線: 70.3小時
- 蟲號: 1024269
- 注冊: 2010-05-20
- 專業(yè): 中藥資源
|
謝謝你的解答！我在看文獻時，別人在圖注中寫明了是3個生物學重復(fù)，可是沒注意到過有寫實驗重復(fù)次數(shù)的啊，實驗重復(fù)次數(shù)也會有要求么？按你的解答，我是不是可以這樣理解，例如說：一次實驗，培養(yǎng)三份植物，測定一個基因的話就要有（3*3）九次技術(shù)重復(fù)，如果再來三次實驗重復(fù)的話就是（3*9）27次了？ 還有一個問題想請教：是不是測每個不同基因的表達差異時都要做各自的標曲�。� 小白求指教 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
3樓2016-05-05 13:52:20
atlanticwi
金蟲 (正式寫手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
- MolEPI: 25
- 應(yīng)助: 138 (高中生)
- 金幣: 141.2
- 散金: 350
- 紅花: 13
- 帖子: 536
- 在線: 313.2小時
- 蟲號: 1099992
- 注冊: 2010-09-15
- 專業(yè): 植物生理與生化
|
一般做處理，檢測基因表達變化的體系，生物學重復(fù)并不等于實驗重復(fù)，我們自己的標準是一次實驗重復(fù)內(nèi)包含兩個生物學重復(fù)，即處理同樣的東西兩份，也有兩個相應(yīng)的對照。qRT-PCR的技術(shù)重復(fù)只是檢測加樣以及實驗系統(tǒng)的誤差。并不算在真正意義上的與實驗相關(guān)的重復(fù)。所以一般直接取平均值用（除非機械重復(fù)很爛，這時候去掉一個離群值，留另兩個做平均，利用平均值來相互比對，如果三個值分散太大，那說明實驗操作問題，整板實驗結(jié)果就不可信），同理生物學重復(fù)也可以取平均值用，但是會帶有自己的SD，你再做三個實驗重復(fù)，就是利用每一次實驗中的三個生物學重復(fù)的平均值相互對比，帶有自己的SEM，所以問題就來了，誤差是可以層層傳遞的（具體我也沒仔細去算過)，真正嚴格的實驗結(jié)果去計算顯示出來是非常復(fù)雜的。同樣誤差棒也賊大了。 所以就折中用趨勢來討論。實驗以一次實驗的代表性結(jié)果來表示，Mean代表一次實驗內(nèi)的2~3次生物學重復(fù)，+/-SD就可以。 第二個問題，基因表達分析，通常用相對定量（2-delta deltaCt法來算），我們不用標曲。 |
4樓2016-05-05 18:14:21
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 一志愿鄭大材料工程290求調(diào)劑 +19 | Youth_ 2026-03-30 | 19/950 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 309求調(diào)劑 +6 | 呆菇不是戴夫 2026-04-02 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 372求調(diào)劑 +3 | jj涌77 2026-04-02 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑一志愿北航070300，本科鄭大化學 +8 | 圣日耳曼條 2026-04-01 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 材料專碩調(diào)劑 +17 | 椰椰。 2026-03-29 | 17/850 |
|
|
|
[考研] 332求調(diào)劑 +8 | Lyy930824@ 2026-03-29 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 省雙一流重點一本大學招收調(diào)劑 +4 | wwwwffffff 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085410人工智能 初試316分 求調(diào)劑 +3 | 殘星拂曙 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿華南師范361分，化學求調(diào)劑 +4 | Nicole88888 2026-04-01 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 263求調(diào)劑 +3 | DDDDuu 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085601 329分調(diào)劑 +6 | yzsa12 2026-03-31 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085404 22408 315分 +5 | zhuangyan123 2026-03-31 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 334求調(diào)劑 +7 | Trying] 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
|
[考博] 材料專業(yè)申博 +5 | 杜雨婷dyt 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 0703化學321分求調(diào)劑 +10 | 三dd. 2026-03-30 | 11/550 |
|
|
|
[考研]
 105500藥學求調(diào)劑，一志愿山東大學藥學，348分
+3
|
gr哈哈哈 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 296求調(diào)劑 +10 | 彼岸t 2026-03-29 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +10 | 張zz111 2026-03-27 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑考研 +3 | 王杰一 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京航空航天大學材料學碩求調(diào)劑 +3 | @taotao 2026-03-28 | 3/150 |
|