 |
 |
 |
| 24小時(shí)熱門(mén)版塊排行榜 |
- >論壇更新日志 (764)
- >考研 (126)
- >導(dǎo)師招生 (92)
- >蟲(chóng)友互識(shí) (51)
- >招聘信息布告欄 (12)
- >考博 (12)
- >碩博家園 (11)
- >文獻(xiàn)求助 (8)
- >基金申請(qǐng) (5)
- >教師之家 (3)
- >論文投稿 (3)
- >職場(chǎng)人生 (2)
- >博后之家 (2)
- >論文道賀祈福 (2)
- >找工作 (2)
- >公派出國(guó) (2)
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 16526 | 回復(fù): 16 | ||
xujingyuanxu銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
|
[求助]
請(qǐng)問(wèn)關(guān)于實(shí)時(shí)熒光定量pcr實(shí)驗(yàn)中重復(fù)次數(shù)的問(wèn)題
|
|
|
想向各位朋友們請(qǐng)教一下，在發(fā)文章時(shí)，基因表達(dá)的這一部分用rtqpcr做的話(huà)是不是每個(gè)樣品最少三個(gè)生物學(xué)重復(fù)��？每個(gè)生物學(xué)重復(fù)要做4-6個(gè)重復(fù)孔么？ 其次，是不是要測(cè)的每個(gè)基因都要做一次標(biāo)曲��？謝謝 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有286人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專(zhuān)業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:
- 關(guān)于Rotor-gene Q儀器溶解曲線(xiàn)的問(wèn)題
已經(jīng)有2人回復(fù)
- 關(guān)于多重Real-time PCR的引物和探針設(shè)計(jì)
已經(jīng)有3人回復(fù)
- 實(shí)時(shí)定量PCR
已經(jīng)有2人回復(fù)
- 求教一個(gè)關(guān)于熒光定量PCR的問(wèn)題
已經(jīng)有6人回復(fù)
atlanticwi
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
- MolEPI: 25
- 應(yīng)助: 138 (高中生)
- 金幣: 141.2
- 散金: 350
- 紅花: 13
- 帖子: 536
- 在線(xiàn): 313.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1099992
- 注冊(cè): 2010-09-15
- 專(zhuān)業(yè): 植物生理與生化
|
一般做處理，檢測(cè)基因表達(dá)變化的體系，生物學(xué)重復(fù)并不等于實(shí)驗(yàn)重復(fù)，我們自己的標(biāo)準(zhǔn)是一次實(shí)驗(yàn)重復(fù)內(nèi)包含兩個(gè)生物學(xué)重復(fù)，即處理同樣的東西兩份，也有兩個(gè)相應(yīng)的對(duì)照。qRT-PCR的技術(shù)重復(fù)只是檢測(cè)加樣以及實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)的誤差。并不算在真正意義上的與實(shí)驗(yàn)相關(guān)的重復(fù)。所以一般直接取平均值用（除非機(jī)械重復(fù)很爛，這時(shí)候去掉一個(gè)離群值，留另兩個(gè)做平均，利用平均值來(lái)相互比對(duì)，如果三個(gè)值分散太大，那說(shuō)明實(shí)驗(yàn)操作問(wèn)題，整板實(shí)驗(yàn)結(jié)果就不可信），同理生物學(xué)重復(fù)也可以取平均值用，但是會(huì)帶有自己的SD，你再做三個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)，就是利用每一次實(shí)驗(yàn)中的三個(gè)生物學(xué)重復(fù)的平均值相互對(duì)比，帶有自己的SEM，所以問(wèn)題就來(lái)了，誤差是可以層層傳遞的（具體我也沒(méi)仔細(xì)去算過(guò))，真正嚴(yán)格的實(shí)驗(yàn)結(jié)果去計(jì)算顯示出來(lái)是非常復(fù)雜的。同樣誤差棒也賊大了。 所以就折中用趨勢(shì)來(lái)討論。實(shí)驗(yàn)以一次實(shí)驗(yàn)的代表性結(jié)果來(lái)表示，Mean代表一次實(shí)驗(yàn)內(nèi)的2~3次生物學(xué)重復(fù)，+/-SD就可以。 第二個(gè)問(wèn)題，基因表達(dá)分析，通常用相對(duì)定量（2-delta deltaCt法來(lái)算），我們不用標(biāo)曲。 |
4樓2016-05-05 18:14:21
atlanticwi
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
- MolEPI: 25
- 應(yīng)助: 138 (高中生)
- 金幣: 141.2
- 散金: 350
- 紅花: 13
- 帖子: 536
- 在線(xiàn): 313.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1099992
- 注冊(cè): 2010-09-15
- 專(zhuān)業(yè): 植物生理與生化
|
.................嗯 對(duì)于qRT-PCR來(lái)說(shuō)，每次一個(gè)反應(yīng)必須有三個(gè)技術(shù)重復(fù)，這是絕對(duì)不能少的。 一般做處理，需要有生物學(xué)重復(fù)，我們一般是兩個(gè) 至于實(shí)驗(yàn)重復(fù)，一般要求三次，看情況來(lái)做 不管你怎么做，Mean+/-SD (SD都應(yīng)該代表的是生物學(xué)重復(fù)，而不能用技術(shù)重復(fù)來(lái)糊弄) 如果你實(shí)驗(yàn)重復(fù)較好，可以酌情做實(shí)驗(yàn)重復(fù)間的Mean+/-SEM 但如果實(shí)驗(yàn)重復(fù)之間趨勢(shì)一致，但基因受調(diào)控的程度波動(dòng)太大，建議圖做成一次實(shí)驗(yàn)重復(fù)內(nèi)的生物學(xué)重復(fù)間的Mean+/-SD，然后注明"進(jìn)行了三次實(shí)驗(yàn)，得到相似結(jié)果，放入的實(shí)驗(yàn)結(jié)果為代表性的........"類(lèi)似話(huà)語(yǔ) 個(gè)人意見(jiàn)，如有說(shuō)錯(cuò)，請(qǐng)指正 |
2樓2016-05-05 13:15:32
xujingyuanxu
銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1168.1
- 散金: 61
- 紅花: 3
- 帖子: 524
- 在線(xiàn): 70.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1024269
- 注冊(cè): 2010-05-20
- 專(zhuān)業(yè): 中藥資源
|
謝謝你的解答！我在看文獻(xiàn)時(shí)，別人在圖注中寫(xiě)明了是3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，可是沒(méi)注意到過(guò)有寫(xiě)實(shí)驗(yàn)重復(fù)次數(shù)的啊，實(shí)驗(yàn)重復(fù)次數(shù)也會(huì)有要求么？按你的解答，我是不是可以這樣理解，例如說(shuō)：一次實(shí)驗(yàn)，培養(yǎng)三份植物，測(cè)定一個(gè)基因的話(huà)就要有（3*3）九次技術(shù)重復(fù)，如果再來(lái)三次實(shí)驗(yàn)重復(fù)的話(huà)就是（3*9）27次了？ 還有一個(gè)問(wèn)題想請(qǐng)教：是不是測(cè)每個(gè)不同基因的表達(dá)差異時(shí)都要做各自的標(biāo)曲��？ 小白求指教 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
3樓2016-05-05 13:52:20
xujingyuanxu
銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1168.1
- 散金: 61
- 紅花: 3
- 帖子: 524
- 在線(xiàn): 70.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1024269
- 注冊(cè): 2010-05-20
- 專(zhuān)業(yè): 中藥資源
|
大神，你好！非常感謝你耐心的解答！我想做植物不同發(fā)育階段的某個(gè)基因表達(dá)變化，分成好多階段，起碼5個(gè)。沒(méi)有特殊處理，那么我這里面的CK組該怎么設(shè)置呢？ 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
5樓2016-05-05 22:32:10
atlanticwi
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
琴美喜歡發(fā)呆 不喜歡發(fā)脾氣
- MolEPI: 25
- 應(yīng)助: 138 (高中生)
- 金幣: 141.2
- 散金: 350
- 紅花: 13
- 帖子: 536
- 在線(xiàn): 313.2小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1099992
- 注冊(cè): 2010-09-15
- 專(zhuān)業(yè): 植物生理與生化
|
根據(jù)你的描述，就不會(huì)有Ck設(shè)置，每個(gè)樣品中某一基因減掉該樣品的內(nèi)參對(duì)照（2^deltaCt法）直接作圖即可。 如果必須要2^-deltadeltaCt法來(lái)做，找你想要作為對(duì)照的那個(gè)發(fā)育階段樣品來(lái)做基準(zhǔn)（也就等同處理實(shí)驗(yàn)中的Ck），這個(gè)樣品的基因表達(dá)值就會(huì)被Normalize到1（2^自己Ct-自己Ct）其他階段的樣品就會(huì)以它為參照，成為相對(duì)表達(dá)量（Y軸的寫(xiě)法也會(huì)變） 問(wèn)題在內(nèi)參上，不能跟隨發(fā)育時(shí)期有太大變化。 另外可以不設(shè)生物學(xué)重復(fù)，直接實(shí)驗(yàn)重復(fù)即可，據(jù)你所說(shuō)的情況，在我的理解范圍內(nèi)，如果不涉及處理?xiàng)l件。生物學(xué)重復(fù)和實(shí)驗(yàn)重復(fù)是等同的。重復(fù)三次保證趨勢(shì)一致即可。表達(dá)量上接近更好 個(gè)人理解，如有錯(cuò)誤，歡迎指出 |
» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）
xujingyuanxu6樓2016-05-06 00:22:45
jingyu90217
新蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 234.8
- 帖子: 79
- 在線(xiàn): 21小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1545411
- 注冊(cè): 2011-12-20
- 專(zhuān)業(yè): 植物生理與生化
|
這要看你的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)具體如何定義不同發(fā)育階段。比如我們有的時(shí)候會(huì)把干種子作為對(duì)照�；蛘甙殉雒绲哪翘熳鳛槌跏紝�(duì)照。然后同一個(gè)處理下采集4個(gè)樣品。即4個(gè)生物學(xué)重復(fù)。再做2次技術(shù)重復(fù)。最后得到8個(gè)值�？梢匀∩岬羝畲蟮摹５辽俦Ａ�6個(gè)做圖和數(shù)據(jù)分析。 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
7樓2016-05-06 02:04:14
xujingyuanxu
銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1168.1
- 散金: 61
- 紅花: 3
- 帖子: 524
- 在線(xiàn): 70.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1024269
- 注冊(cè): 2010-05-20
- 專(zhuān)業(yè): 中藥資源
8樓2016-05-06 07:09:20
xujingyuanxu
銅蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- 應(yīng)助: 2 (幼兒園)
- 金幣: 1168.1
- 散金: 61
- 紅花: 3
- 帖子: 524
- 在線(xiàn): 70.3小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 1024269
- 注冊(cè): 2010-05-20
- 專(zhuān)業(yè): 中藥資源
9樓2016-05-06 07:10:18
|
一般可以三個(gè)生物學(xué)重復(fù)，每次4個(gè)重復(fù)孔，技術(shù)重復(fù)就看你操作了，如果結(jié)果很好的話(huà)，就不需要技術(shù)重復(fù)吧。至于標(biāo)��？應(yīng)該是指引物的梯度吧？理論上是要的，但實(shí)際中很多人往往沒(méi)有做…… 只要結(jié)果是好的就默認(rèn)引物可以… 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶(hù)端 |
10樓2016-05-06 08:43:00
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 xujingyuanxu 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085410 一志愿211 22408分?jǐn)?shù)359求調(diào)劑 +3 | 123456789qw 2026-03-31 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +9 | 一樣YWY 2026-04-01 | 9/450 |
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +7 | 莫xiao 2026-04-01 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 270求調(diào)劑 +7 | 小杰pp 2026-03-31 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 362求調(diào)劑 +13 | 西南交材料專(zhuān)碩3 2026-03-31 | 13/650 |
|
|
|
[考研]
 一志愿廈門(mén)大學(xué)化學(xué)學(xué)碩307求調(diào)劑
+11
|
y7czhao 2026-03-26 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 0856，材料與化工321分求調(diào)劑 +13 | 大饞小子 2026-03-27 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 一志愿211，335分，0856，求調(diào)劑院校和導(dǎo)師 +11 | 傾____蕭 2026-03-27 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 324求調(diào)劑 +4 | 想上學(xué)求調(diào) 2026-04-01 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿中農(nóng)0710生物學(xué)，微生物方向總分338求調(diào)劑 +3 | 柒xxxx. 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 生物學(xué)296求調(diào)劑 +10 | 湯圓包 2026-03-29 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 考研生物與醫(yī)藥調(diào)劑 +7 | 鐵憨憨123425 2026-03-31 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 352分-085602-一志愿985 +6 | 海納百川Ly 2026-03-29 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 一志愿中海洋材料357 +4 | 麥恩莉. 2026-03-30 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 272求調(diào)劑，接受跨專(zhuān)業(yè)調(diào)劑！ +3 | 閑魚(yú)盧 2026-03-31 | 3/150 |
|
|
|
[考博] 材料專(zhuān)業(yè)申博 +5 | 杜雨婷dyt 2026-03-29 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 310求調(diào)劑 +10 | 爭(zhēng)取九點(diǎn)睡 2026-03-30 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +10 | 張zz111 2026-03-27 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 298求調(diào)劑 +3 | 種圣賜 2026-03-29 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 292求調(diào)劑 +4 | 求求了收下我吧?/a> 2026-03-26 | 4/200 |
|