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lynn111666銅蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
RT后的cDNA可以稀釋嗎？ 已有1人參與
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最近做RT-PCR，但是用Takara的RR047A做RT后得到的cDNA（共20μL），如果按Takara的RR420A做PCR的話(huà)，cDNA完全不夠(20μL的PCR體系，加2μLcDNA)。 那可以先把得到的cDNA先稀釋下，少加點(diǎn)嗎？ 能把20μL的PCR體系改成10μL的嗎？ PCR試劑盒中的ROX可以不加嗎？（PCR儀器：stepone plus） 謝謝！  |
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030Selma
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2樓2016-05-17 00:35:15
atlanticwi
金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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............................. cDNA從來(lái)都是要稀釋用的�。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。�！ cDNA從來(lái)都是要稀釋用的�。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。� cDNA從來(lái)都是要稀釋用的�。。。。。。。。。。。。。。。。。。。。�！ 只要你的起始量RNA按實(shí)驗(yàn)說(shuō)明書(shū)來(lái)做（20 uL體系 1~10ug RNA） 但這不是重點(diǎn)！ 重點(diǎn)是，RT后的cDNA含有眾多雜質(zhì)（反轉(zhuǎn)錄酶 buffer dNTPs Oligo等）這些對(duì)下游的PCR都是不利的。 所以需要稀釋使用，做基因克隆，半定量我們一般稀釋10~20倍 定量雖然不稀釋?zhuān)羌拥臉O少，一個(gè)孔加0.02ul 理論上做一次20ul體系的cDNA夠你做很多很多很多很多很多很多很多很多很多實(shí)驗(yàn)的。 |
3樓2016-05-17 09:43:52
yspflyfuture
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4樓2016-08-03 14:57:53
prthefu
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還要稀釋嗎？我剛做了半個(gè)月的RT，都沒(méi)有稀釋?zhuān)瑤熜謳熃愀嬖V我說(shuō)只要得到的ct值<30就沒(méi)什么問(wèn)題，越稀釋?zhuān)０鍧舛鹊�，ct值較高 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶(hù)端 |
5樓2016-08-03 23:24:35
浮笙若夢(mèng)
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6樓2016-08-04 09:59:59
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