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Dugutoufu銅蟲(chóng) (初入文壇)
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運(yùn)用crispr/cas9進(jìn)行基因敲除，pCas質(zhì)�？偸菬o(wú)法轉(zhuǎn)進(jìn)感受態(tài)中，求大神的指導(dǎo)啊~ 已有2人參與
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產(chǎn)氣腸桿菌與大腸桿菌的同源性很高，理論上可以進(jìn)行crispr基因敲除，但是我將pCas電轉(zhuǎn)了很多次，還是轉(zhuǎn)不進(jìn)去，制備的感受態(tài)沒(méi)有問(wèn)題，質(zhì)粒濃度大約200ng，電轉(zhuǎn)的條件是：2200V，200Ω，25uF，2mm的電轉(zhuǎn)杯，電轉(zhuǎn)時(shí)間大概在5毫秒左右，菌體在抗性板上長(zhǎng)，抗性板是kan50，大約18個(gè)小時(shí)之后能長(zhǎng)出菌落。挑取單菌落在同樣抗性的液體里也能長(zhǎng)，但是再提取質(zhì)粒驗(yàn)證時(shí)，完全提不出來(lái)，想請(qǐng)問(wèn)各路大神這是什么原因啊？做了兩個(gè)月~~ 求大神們提提意見(jiàn) @youlinglyw@wizardfan@飛約瘋?cè)嗽?/u>@biostar2009 |
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卡那霉素做抗生素合理嗎？這個(gè)菌本身有沒(méi)有這個(gè)抗性基因？ 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
3樓2016-05-26 10:44:31
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kan沒(méi)有失效呢～我的質(zhì)粒有點(diǎn)大，12.5k 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
4樓2016-05-26 19:29:16
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這個(gè)菌本身是氨芐抗性，pCas是kan抗性，所以不會(huì)出現(xiàn)抗性不相容的問(wèn)題 發(fā)自小木蟲(chóng)IOS客戶端 |
5樓2016-05-26 19:31:03
ken19860823
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6樓2016-05-27 19:28:01
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7樓2016-05-27 22:42:44
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8樓2016-05-28 07:24:13
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目標(biāo)菌是什么？質(zhì)粒擴(kuò)增菌又是什么？如果你的質(zhì)粒已經(jīng)重組到基因組中，那是可能會(huì)導(dǎo)致質(zhì)粒丟失的。 發(fā)自小木蟲(chóng)Android客戶端 |
9樓2016-05-29 09:18:48
10樓2016-08-14 12:31:11
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