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Dugutoufu銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
運(yùn)用crispr/cas9進(jìn)行基因敲除，pCas質(zhì)�？偸菬o法轉(zhuǎn)進(jìn)感受態(tài)中，求大神的指導(dǎo)啊~ 已有2人參與
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產(chǎn)氣腸桿菌與大腸桿菌的同源性很高，理論上可以進(jìn)行crispr基因敲除，但是我將pCas電轉(zhuǎn)了很多次，還是轉(zhuǎn)不進(jìn)去，制備的感受態(tài)沒有問題，質(zhì)粒濃度大約200ng，電轉(zhuǎn)的條件是：2200V，200Ω，25uF，2mm的電轉(zhuǎn)杯，電轉(zhuǎn)時(shí)間大概在5毫秒左右，菌體在抗性板上長(zhǎng)，抗性板是kan50，大約18個(gè)小時(shí)之后能長(zhǎng)出菌落。挑取單菌落在同樣抗性的液體里也能長(zhǎng)，但是再提取質(zhì)粒驗(yàn)證時(shí)，完全提不出來，想請(qǐng)問各路大神這是什么原因啊？做了兩個(gè)月~~ 求大神們提提意見 @youlinglyw@wizardfan@飛約瘋?cè)嗽?/u>@biostar2009 |
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Dugutoufu
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kan沒有失效呢～我的質(zhì)粒有點(diǎn)大，12.5k 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
4樓2016-05-26 19:29:16
黃小萌萌
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2樓2016-05-26 10:43:35
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卡那霉素做抗生素合理嗎？這個(gè)菌本身有沒有這個(gè)抗性基因？ 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
3樓2016-05-26 10:44:31
Dugutoufu
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這個(gè)菌本身是氨芐抗性，pCas是kan抗性，所以不會(huì)出現(xiàn)抗性不相容的問題 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
5樓2016-05-26 19:31:03
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