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zouzongsheng新蟲 (小有名氣)
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[求助]
從基因組上pcr 做梯度出現(xiàn)仍然出現(xiàn)多條帶 已有1人參與
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這是從基因組上P 進(jìn)行驗證，設(shè)置的梯度 退火溫度從48 到62 左邊10 個孔是用一對引物P的 目的條帶大小655bp 右邊十個用的另一對引物 目的條帶大小920bp P的是同一個基因 用的2000的Maker 請問還是出現(xiàn)這種情況該怎么優(yōu)化呢？ |
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2016-06-01 15:26:41, 45.54 K
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9樓2016-06-03 23:05:43
原海亮
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【答案】應(yīng)助回帖
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myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰·手有余香，謝謝你的理解與支持。myprayer祝您科研順利，文章多多。 2016-06-02 21:55:08
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用基因組做模板進(jìn)行pcr，確實會出現(xiàn)非常多非特異性條帶，這個很正常，甚至有時候無法避免，那么你需要確定的就是，在某個條件下，你的目的條帶的濃度最高，然后通過切膠回收來進(jìn)行下游的實驗。看了一下你的膠圖，不知道你的循環(huán)數(shù)有多少，當(dāng)然主要是本身引物質(zhì)量不高，這個可能因為實驗需要沒辦法改變，那么退火溫度還可以再高一些，到70度左右都可以的。還有不知道你的模板GC含量如何，需要的話，可以用GC buffer試試。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-06-01 21:47:55
zouzongsheng
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3樓2016-06-02 17:15:01
zouzongsheng
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4樓2016-06-02 17:15:28
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