 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 926 | 回復(fù): 6 | ||
jinling158銅蟲(chóng) (小有名氣)
|
[求助]
實(shí)時(shí)熒光PCR咨詢-不勝感激 已有2人參與
|
|
我最近正研制細(xì)菌實(shí)時(shí)熒光PCR檢測(cè)試劑盒，但是碰到了一些問(wèn)題，兩三個(gè)月之前做出的靈敏度還可以，但三個(gè)月之后就靈敏度降低了，Ct值增加了2~3，但是試劑什么的都沒(méi)有變啊。我用的ABI預(yù)混液，難道是酶降解了（一直按照說(shuō)明書(shū)4度保存，但其中有一晚上冰箱壞了第2天上午修好了，這個(gè)應(yīng)該不會(huì)有影響吧）？另外，難道引物探針也降解了？引物探針的純化方式是PAGE，這種純化方式是不是沒(méi)有離子交換HPLC的純度和穩(wěn)定性好��？都是PAGE純化，不同公司合成的探針質(zhì)量是不是不一樣呢？寶生物銷(xiāo)售跟我說(shuō)他們合成的探針質(zhì)量好。又或是我的DNA降解了？對(duì)于低濃度的質(zhì)粒DNA，有沒(méi)有好的保存方法啊？比如說(shuō)用低吸附的管子，里面要加一些什么樣的保護(hù)劑嗎？負(fù)20度還是負(fù)80度保存呢？ 謝謝各位！對(duì)您的答復(fù)不勝感激！ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有289人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
2樓2016-07-22 14:08:08
3樓2016-08-01 09:53:30
★ ★ ★
西門(mén)吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-08-05 22:47:26
西門(mén)吹雪170: 金幣+3, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-08-05 22:47:26
|
我也一直在做Ct相關(guān)的qPCR,有幾種原因可能導(dǎo)致Ct靠后： 1.探針最好是HPLC純化方式，PAGE對(duì)探針來(lái)說(shuō)純化不夠，引物PAGE純化OK，不同廠商合成的有差異，TAKARA算不錯(cuò)的。 2.引物探針用TE溶解，并分裝，減少反復(fù)凍融，探針?lè)盅b于棕色不透明管防止熒光標(biāo)記降解。 3.模板降解：盡量用高濃度質(zhì)粒保存于-20度，少凍融，用于做靈敏度的質(zhì)粒濃度肯定很低，易降解，最好每次都用高濃度來(lái)現(xiàn)配現(xiàn)用。 希望對(duì)你有用。 |
4樓2016-08-05 17:15:15
足下客
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
- MolEPI: 10
- 應(yīng)助: 39 (小學(xué)生)
- 金幣: 1858.8
- 散金: 211
- 紅花: 12
- 帖子: 888
- 在線: 110.4小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 426612
- 注冊(cè): 2007-07-28
- 性別: MM
- 專業(yè): 臨床分子生物學(xué)檢驗(yàn)
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-11-14 07:41:25
西門(mén)吹雪170: 金幣+2, 鼓勵(lì)回帖交流 2016-11-14 07:41:25
|
靈敏度降低時(shí)很正常的，我們公司研發(fā)生產(chǎn)的試劑盒有些也會(huì)出現(xiàn)這種情況，產(chǎn)品正式輸出以前，都會(huì)做穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)的，反復(fù)凍融，實(shí)時(shí)穩(wěn)定性，開(kāi)瓶穩(wěn)定性等。我們說(shuō)明書(shū)上會(huì) 要求反復(fù)凍融不能超過(guò)三次，但是實(shí)際上有的凍融2次不光Ct值延后，而且熒光增峰也會(huì)下降。 我想問(wèn)一下你的ABI預(yù)混液是放到哪里保存的？酶是單獨(dú)添加的嗎？ 我們調(diào)試試劑用的buffer和酶等原料都是自己配置的。 熒光PCR檢測(cè)試劑盒最重要的兩部分，一是探針引物的設(shè)計(jì)合成。二是酶反應(yīng)體系。你可以一項(xiàng)項(xiàng)的排除一下 |
5樓2016-08-08 10:12:49
jinling158
銅蟲(chóng) (小有名氣)
- 應(yīng)助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 50.5
- 帖子: 129
- 在線: 54.8小時(shí)
- 蟲(chóng)號(hào): 474859
- 注冊(cè): 2007-12-06
- 專業(yè): 病原細(xì)菌與放線菌生物學(xué)
6樓2016-08-15 20:30:57
7樓2016-11-14 07:25:49
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 jinling158 的主題更新
| 7 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 085601材料工程找調(diào)劑 +6 | oatmealR 2026-03-29 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 求收留 +4 | 1943443204 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 356求調(diào)劑 +4 | gysy?s?a 2026-03-28 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 279求調(diào)劑 +4 | 蝶舞輕繞 2026-03-29 | 4/200 |
|
|
[考研] 調(diào)劑310 +8 | 溫柔的晚安 2026-03-25 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +13 | 新時(shí)代材料 2026-03-27 | 13/650 |
|
|
|
[考研] 316求調(diào)劑 +7 | 江辭666 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 食品工程專碩一志愿中海洋309求調(diào)劑 +4 | 小張zxy張 2026-03-26 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿華理，數(shù)一英一285求A區(qū)調(diào)劑 +8 | AZMK 2026-03-25 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +6 | 蘆lty 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 張芳銘-中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)-環(huán)境工程專碩-298 +4 | 手機(jī)用戶 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 086502化學(xué)工程342求調(diào)劑 +6 | 阿姨復(fù)古不過(guò) 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)一志愿南京師范大學(xué)303求調(diào)劑 +3 | zzffylgg 2026-03-24 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿陜師大生物學(xué)071000，298分，求調(diào)劑 +5 | SYA！ 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 一志愿上海交大生物與醫(yī)藥專碩324分，求調(diào)劑 +6 | jiajunX 2026-03-22 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 26考研-291分-廈門(mén)大學(xué)（085601）-柔性電子學(xué)院材料工程專業(yè)求調(diào)劑 +3 | min3 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854AI CV方向招收調(diào)劑 +4 | 章小魚(yú)567 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 材料調(diào)劑 +3 | iwinso 2026-03-23 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理085500機(jī)械專業(yè)總分300求調(diào)劑 +3 | an10101 2026-03-24 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 280分求調(diào)劑 一志愿085802 +4 | PUMPT 2026-03-22 | 7/350 |
|