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jinling158銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
實時熒光PCR咨詢-不勝感激 已有2人參與
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我最近正研制細菌實時熒光PCR檢測試劑盒，但是碰到了一些問題，兩三個月之前做出的靈敏度還可以，但三個月之后就靈敏度降低了，Ct值增加了2~3，但是試劑什么的都沒有變啊。我用的ABI預混液，難道是酶降解了（一直按照說明書4度保存，但其中有一晚上冰箱壞了第2天上午修好了，這個應該不會有影響吧）？另外，難道引物探針也降解了？引物探針的純化方式是PAGE，這種純化方式是不是沒有離子交換HPLC的純度和穩(wěn)定性好�。慷际荘AGE純化，不同公司合成的探針質量是不是不一樣呢？寶生物銷售跟我說他們合成的探針質量好。又或是我的DNA降解了？對于低濃度的質粒DNA，有沒有好的保存方法��？比如說用低吸附的管子，里面要加一些什么樣的保護劑嗎？負20度還是負80度保存呢？ 謝謝各位！對您的答復不勝感激！ |
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2樓2016-07-22 14:08:08
3樓2016-08-01 09:53:30
4樓2016-08-05 17:15:15
足下客
木蟲 (正式寫手)
- MolEPI: 10
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- 專業(yè): 臨床分子生物學檢驗
【答案】應助回帖
★ ★
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2016-11-14 07:41:25
西門吹雪170: 金幣+2, 鼓勵回帖交流 2016-11-14 07:41:25
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靈敏度降低時很正常的，我們公司研發(fā)生產的試劑盒有些也會出現(xiàn)這種情況，產品正式輸出以前，都會做穩(wěn)定性實驗的，反復凍融，實時穩(wěn)定性，開瓶穩(wěn)定性等。我們說明書上會 要求反復凍融不能超過三次，但是實際上有的凍融2次不光Ct值延后，而且熒光增峰也會下降。 我想問一下你的ABI預混液是放到哪里保存的？酶是單獨添加的嗎？ 我們調試試劑用的buffer和酶等原料都是自己配置的。 熒光PCR檢測試劑盒最重要的兩部分，一是探針引物的設計合成。二是酶反應體系。你可以一項項的排除一下 |
5樓2016-08-08 10:12:49
jinling158
銅蟲 (小有名氣)
- 應助: 0 (幼兒園)
- 金幣: 50.5
- 帖子: 129
- 在線: 54.8小時
- 蟲號: 474859
- 注冊: 2007-12-06
- 專業(yè): 病原細菌與放線菌生物學
6樓2016-08-15 20:30:57
7樓2016-11-14 07:25:49
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