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egmnmt65金蟲 (初入文壇)
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[求助]
蛋白表達(dá)求助 已有1人參與
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我一直在做真核酵母表達(dá)但是蛋白跑膠的時候沒有目的蛋白條帶,我做激酶蛋白的表達(dá),用的載體是PPICZB,酵母是畢赤酵母,醇氧化酶基因Aox1啟動子啟動外源基因的表達(dá),誘導(dǎo)表達(dá)的誘導(dǎo)物是甲醇,誘導(dǎo)溫度是28℃,誘導(dǎo)時間48-72小時,但是已經(jīng)做了7-8次了沒有任何的目的蛋白表達(dá)出來。我的師兄(已經(jīng)畢業(yè))曾經(jīng)表達(dá)出來過一次,因為趕上了春節(jié)回家過了一個年,回來后再也表達(dá)不出來了。有一次我做預(yù)實驗好像表達(dá)出來一次,但是當(dāng)大量表達(dá)的時候又沒有了。這次的菌種是從-80℃拿出來的,當(dāng)時師兄表達(dá)出來的也是從-80℃拿出來的,不知道低溫儲藏菌種和蛋白表達(dá)出來之間有沒有必然的聯(lián)系,可惜原始菌種的最后一點被我做預(yù)實驗用掉了,當(dāng)時也沒意識到這個問題就沒有保存菌種,很后悔!求大神指導(dǎo)一下吧! @gyesang @hc-material 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
鐵蟲 (小有名氣)
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再用預(yù)實驗的體系誘導(dǎo)一次,如果成功,那很可能是大量誘導(dǎo)時體系氧氣不足,考慮用多瓶每瓶裝少量誘導(dǎo)。如預(yù)實驗體系無法成功,考慮改變誘導(dǎo)溫度試試 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
金蟲 (初入文壇)
專家顧問 (職業(yè)作家)
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專家經(jīng)驗: +702 |
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我也在做誘導(dǎo)表達(dá)~也是年前可以表達(dá),年后回來就不能表達(dá)或表達(dá)量太少,還沒找到原因~好傷心…… 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
新蟲 (小有名氣)
新蟲 (初入文壇)
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