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egmnmt65金蟲 (初入文壇)
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[求助]
蛋白表達求助 已有1人參與
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我一直在做真核酵母表達但是蛋白跑膠的時候沒有目的蛋白條帶，我做激酶蛋白的表達，用的載體是PPICZB,酵母是畢赤酵母，醇氧化酶基因Aox1啟動子啟動外源基因的表達，誘導(dǎo)表達的誘導(dǎo)物是甲醇，誘導(dǎo)溫度是28℃，誘導(dǎo)時間48-72小時，但是已經(jīng)做了7-8次了沒有任何的目的蛋白表達出來。我的師兄（已經(jīng)畢業(yè)）曾經(jīng)表達出來過一次，因為趕上了春節(jié)回家過了一個年，回來后再也表達不出來了。有一次我做預(yù)實驗好像表達出來一次，但是當(dāng)大量表達的時候又沒有了。這次的菌種是從-80℃拿出來的，當(dāng)時師兄表達出來的也是從-80℃拿出來的，不知道低溫儲藏菌種和蛋白表達出來之間有沒有必然的聯(lián)系，可惜原始菌種的最后一點被我做預(yù)實驗用掉了，當(dāng)時也沒意識到這個問題就沒有保存菌種，很后悔啊！求大神指導(dǎo)一下吧！ @gyesang @hc-material 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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再用預(yù)實驗的體系誘導(dǎo)一次，如果成功，那很可能是大量誘導(dǎo)時體系氧氣不足，考慮用多瓶每瓶裝少量誘導(dǎo)。如預(yù)實驗體系無法成功，考慮改變誘導(dǎo)溫度試試 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-10-04 22:49:48
egmnmt65
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7樓2018-07-02 10:08:08
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