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egmnmt65金蟲 (初入文壇)
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[求助]
蛋白表達(dá)求助 已有1人參與
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我一直在做真核酵母表達(dá)但是蛋白跑膠的時(shí)候沒有目的蛋白條帶，我做激酶蛋白的表達(dá)，用的載體是PPICZB,酵母是畢赤酵母，醇氧化酶基因Aox1啟動(dòng)子啟動(dòng)外源基因的表達(dá)，誘導(dǎo)表達(dá)的誘導(dǎo)物是甲醇，誘導(dǎo)溫度是28℃，誘導(dǎo)時(shí)間48-72小時(shí)，但是已經(jīng)做了7-8次了沒有任何的目的蛋白表達(dá)出來。我的師兄（已經(jīng)畢業(yè)）曾經(jīng)表達(dá)出來過一次，因?yàn)橼s上了春節(jié)回家過了一個(gè)年，回來后再也表達(dá)不出來了。有一次我做預(yù)實(shí)驗(yàn)好像表達(dá)出來一次，但是當(dāng)大量表達(dá)的時(shí)候又沒有了。這次的菌種是從-80℃拿出來的，當(dāng)時(shí)師兄表達(dá)出來的也是從-80℃拿出來的，不知道低溫儲(chǔ)藏菌種和蛋白表達(dá)出來之間有沒有必然的聯(lián)系，可惜原始菌種的最后一點(diǎn)被我做預(yù)實(shí)驗(yàn)用掉了，當(dāng)時(shí)也沒意識(shí)到這個(gè)問題就沒有保存菌種，很后悔��！求大神指導(dǎo)一下吧！ @gyesang @hc-material 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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我也在做誘導(dǎo)表達(dá)～也是年前可以表達(dá)，年后回來就不能表達(dá)或表達(dá)量太少，還沒找到原因～好傷心…… 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
5樓2018-04-06 00:51:22
凌波水簾
鐵蟲 (小有名氣)
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再用預(yù)實(shí)驗(yàn)的體系誘導(dǎo)一次，如果成功，那很可能是大量誘導(dǎo)時(shí)體系氧氣不足，考慮用多瓶每瓶裝少量誘導(dǎo)。如預(yù)實(shí)驗(yàn)體系無法成功，考慮改變誘導(dǎo)溫度試試 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
2樓2016-10-04 22:49:48
egmnmt65
金蟲 (初入文壇)
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3樓2016-10-06 11:51:04
hc-material
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4樓2016-10-09 14:19:59
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