 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 860 | 回復(fù): 2 | |||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖 | |||
1393075615木蟲 (知名作家)
|
[交流]
蛋白表達(dá)純化 已有2人參與
|
||
| 我是一名本科生，跟著老師們?cè)谧隹蒲袑?shí)驗(yàn)，前期將一個(gè)基因連接到PTYB12上（連上以后含有CBD標(biāo)簽不連空載也有CBD標(biāo)簽），菌液PCR一切正常，但是測(cè)序一直不正確，所以老師直接把序列給公司去做了，回來以后，將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化進(jìn)入感受態(tài)細(xì)胞，做菌液PCR條帶大小正常，然后又酶切小片段也對(duì)，但轉(zhuǎn)化進(jìn)入rp感受態(tài)細(xì)胞以后不會(huì)長(zhǎng)，所以換了表達(dá)菌株BL21細(xì)胞，長(zhǎng)出了細(xì)胞，用LB培養(yǎng)，菌液PCR沒問題，但是最后蛋白不表達(dá)，誘導(dǎo)條件，以及溫度時(shí)間都摸索過，另外掛過柱子以后，空載可以純化出來，但是連過基因的什么都沒有，求解各位大神，該如何解決這個(gè)蛋白不表達(dá)問題。 |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
346求調(diào)劑[0856]
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
一志愿山大07化學(xué) 332分 四六級(jí)已過 本科山東雙非 求調(diào)劑！
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
310求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
機(jī)械專碩299求調(diào)劑至材料
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
070300化學(xué)319求調(diào)劑
已經(jīng)有7人回復(fù)
-
08工科 320總分 求調(diào)劑
已經(jīng)有6人回復(fù)
-
一志愿天津大學(xué)化學(xué)工藝專業(yè)（081702）315分求調(diào)劑
已經(jīng)有12人回復(fù)
-
307求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
265求調(diào)劑
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
301求調(diào)劑
已經(jīng)有10人回復(fù)
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
|
關(guān)于蛋白不表達(dá)的原因可以從多方面分析，你BL21菌株是原核表達(dá)，原核表達(dá)一般是比較容易做的，幾點(diǎn)蛋白不表達(dá)原因分析 1）密碼子優(yōu)化問題，根據(jù)密碼子的簡(jiǎn)并性可知換掉堿基序列氨基酸不變，所以根據(jù)自己表達(dá)系統(tǒng)（你這是原核）進(jìn)行密碼子優(yōu)化，不同的表達(dá)系統(tǒng)有不同的密碼子偏愛性； 2）mRNA結(jié)構(gòu)優(yōu)化，同樣的mRNA結(jié)構(gòu)沒有優(yōu)化會(huì)導(dǎo)致蛋白的錯(cuò)誤折疊，表達(dá)的蛋白沒有活性； 3）表達(dá)載體選擇噶首臺(tái)選擇及表達(dá)條件優(yōu)化：這一項(xiàng)設(shè)計(jì)的比較多，一般感受態(tài)多做幾個(gè)，做個(gè)對(duì)比，還有的特定蛋白只能使用特定感受態(tài)才能做，條件設(shè)置不同的梯度，有可能你現(xiàn)在表達(dá)量低，你看不出來，IPTG濃度，降溫表達(dá)都可以嘗試。 具體的其他及相關(guān)解決方案可見文檔：原核表達(dá)FAQ問題解決 |
3樓2016-10-27 14:12:43
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
|
蛋白表達(dá)不是測(cè)序正確就一定出來的，原核表達(dá)最基本需要有正確的閱讀框，和上游的rd序列，外加強(qiáng)終止子 發(fā)自小木蟲IOS客戶端 |
2樓2016-10-04 20:03:21
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +6 | 曼殊2266 2026-03-18 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 311求調(diào)劑 +5 | 冬十三 2026-03-18 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 330求調(diào)劑 +4 | 小材化本科 2026-03-18 | 4/200 |
|
|
[考研] 求調(diào)劑一志愿南京航空航天大學(xué)289分 +3 | @taotao 2026-03-19 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿武理材料工程348求調(diào)劑 +3 | ￣^￣゜汗 2026-03-19 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中農(nóng)業(yè)071010，總分320求調(diào)劑 +3 | 困困困困坤坤 2026-03-20 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 295材料求調(diào)劑，一志愿武漢理工085601專碩 +5 | Charlieyq 2026-03-19 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 081700化工學(xué)碩調(diào)劑 +3 | 【1】 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 288求調(diào)劑，一志愿華南理工大學(xué)071005 +5 | ioodiiij 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調(diào)劑 324分 +10 | llllkkkhh 2026-03-18 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 344求調(diào)劑 +6 | knight344 2026-03-16 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 302求調(diào)劑 +10 | 呼呼呼。。。。 2026-03-17 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 材料，紡織，生物（0856、0710），化學(xué)招生啦 +3 | Eember. 2026-03-17 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)336分求調(diào)劑 +6 | zbzihdhd 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料工程專碩274一志愿211求調(diào)劑 +6 | 薛云鵬 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[論文投稿] 有沒有大佬發(fā)小論文能帶我個(gè)二作 +3 | 增銳漏人 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +4 | 諾貝爾化學(xué)獎(jiǎng)覬?/a> 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +6 | 太想進(jìn)步了0608 2026-03-16 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 中科大材料與化工319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +4 | 這么名字咋樣 2026-03-14 | 6/300 |
|