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PCR產(chǎn)物酶切連接pET 28a，測序發(fā)現(xiàn)引物部分堿基缺一個C
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最近實驗一直不順利，各種突變和缺失，累覺不愛。 上游引物加了保護堿基和Ndel/Xbal酶切位點，引物開頭是5’-tctagaCATATGGCCAG......... 測序回來，峰圖很干凈，完全沒有套峰。 突變的堿基就不管了，但是開頭CATATGGCAG， 少了個C！��！后面都亂碼了，跪。。。。。 問了生工測序，也回答說測序沒問題。 我覺得也不該是KOD酶的問題吧，畢竟在引物上呢，也能突變?nèi)笔�？會不會是引物本身少了C導致的，雖然檢測報告寫的正常。 |
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我的測序開頭多了個堿基c 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
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不是，我的是插入片段。在測序結(jié)果剛開始的10bp里多。 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
8樓2016-12-06 22:30:14
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引物本身有問題吧 發(fā)自小木蟲Android客戶端 |
10樓2016-12-06 23:01:31
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